甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂抑制肝癌上皮—间充质转化的作用

发布时间：2017-09-17 09:28

  本文关键词：甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂抑制肝癌上皮—间充质转化的作用

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【摘要】：目的：原发性肝癌(肝癌)是一种恶性程度高、早期浸润和转移性强的肿瘤,我国发病人数约占全球的55%;在肿瘤相关死亡中仅次于肺癌,位居第二。其病因和发病机制尚未确定。随着原发性肝癌早期诊断、早期治疗,总体疗效已有明显提高。但肝癌术后的高复发与转移仍是制约进一步提高肝癌远期疗效的瓶颈。研究表明上皮间质转化(epithelial mesenchymal transitions, EMT)是肝癌发生侵袭转移的重要原因,但其发生的机制不明。肿瘤细胞高表达甘露糖是其细胞恶变常见的特点之一,因此肿瘤细胞表面甘露糖被认为是肿瘤治疗的一个重要靶点。甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂(Pseudomonasaeruginosa mannose sensitive hamemagglutination vaccine, PA-MSHA)是基因工程合成的表达甘露糖敏感性I型菌毛的灭活绿脓杆菌制剂,被证实能够通过其菌毛识别结合表达甘露糖的肿瘤细胞而发挥普通灭活绿脓杆菌制剂不具有细胞毒作用,是一种新型广谱免疫调节剂。我们前期研究发现PA-MSHA能够通过抑制肝癌EMT的发生而抑制其转移,但是其相关信号通路及作用机制目前尚不明确。本研究欲在前期研究的基础上进一步探索PA-MSHA抑制肝癌EMT发生的分子机制。方法：(1)培养人肝癌细胞株MHCC97L及HepG2,按照需要分为对照组；低剂量PA-MSHA组(1×108/ml)：高剂量PA-MSHA组(2 × 108/ml);高剂量PA-MSHA(2 ×108/ml)+甘露糖(100mM)组。显微镜观察细胞形态学变化,免疫荧光技术及Western Blot检测PA-MSHA作用前后肝癌细胞EMT相关基因及转录因子的表达情况。(2)将5×106/ml肝癌细胞注射于4-6周龄BALB/cnu/nu雄性裸鼠皮下,4周后无菌条件下取出皮下肿瘤,切成2mm大小植入戊巴比妥钠腹腔注射麻醉的裸鼠肝脏。于接种后第3天开始用药,分生理盐水腹腔注射组(0.2ml/d)及PA-MSHA腹腔注射组(0.2ml/d),每组12只。治疗持续40d,于种植后第6周末处死动物。免疫组化及RT-PCR技术检测PA-MSHA治疗前后裸鼠模型肝癌组织E-cadherin及转录因子snail和Pslug表达情况。结果：(1)Western Blot结果显示与对照组相比PA-MSHA治疗组肝癌细胞E-cadherin表达显著增强,而vimentin、fibronecin、NF-κB以及转录因子snail和slug的表达显著降低,其效应呈现剂量依赖性,而外源性甘露糖显著抑制PA-MSHA对上述蛋白的调控作用。免疫荧光也显示PA-MSHA上调肝癌细胞E-cadherin表达而抑制vimentin的表达,显微镜下细胞形态也由不规则的梭形转变为相对规则的卵圆形。(2)免疫组化显示荷瘤裸鼠经PA-MSHA治疗后肝癌组织E-cadherin的表达显著增强,而snail mRNA及slug mRNA的转录则受到显著抑制(P0.05)。结论：PA-MSHA可以通过识别结合肝细胞癌细胞表面的甘露糖显著抑制肝癌EMT的发生。
【关键词】：肝细胞癌 绿脓杆菌 甘露糖 上皮-间充质转化
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符号说明10-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-31
• 实验结果31-32
• 讨论32-37
• 结论37-38
• 附录一表格38-39
• 附录二图片39-41
• 参考文献41-45
• 致谢45-46
• 攻读学位期间发表学术论文46-47
• 学位论文评阅及答辩情况表47

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 林涛;宋纯;王辉;;晚期结直肠癌术中使用铜绿假单胞杆菌制剂的生存期观察[J];中国肺癌杂志;2009年06期

2 宋爱琳;曹农;;铜绿假单胞菌注射液防治乳腺癌术后皮下积液的临床研究[J];辽宁医学杂志;2012年02期

3 朱江;张国利;魏斌;;铜绿假单胞菌注射液在老年晚期胃癌手术中的临床应用[J];辽宁医学杂志;2012年03期

4 王浦华;沈通一;葛海燕;;铜绿假单胞菌制剂在恶性肿瘤中的辅助治疗作用[J];世界华人消化杂志;2010年30期

5 郑朝旭;冯强;徐泉;谢玉权;梁建明;袁兴华;;胃癌患者铜绿假单胞菌制剂术中腹腔置药对免疫功能的影响[J];中国肿瘤;2012年05期

6 王浩;罗以;唐利立;;铜绿假单胞菌注射液治疗乳腺癌癌性溃疡的临床研究[J];中南药学;2010年01期

7 王浩;唐利立;;铜绿假单胞菌注射液对人乳腺癌细胞的体外杀伤及促凋亡作用研究[J];中南药学;2010年04期

8 沈娣;王腾;杭晓声;徐闻欢;;铜绿假单胞菌注射液联合化疗治疗晚期胃癌的临床观察[J];中南药学;2011年07期

9 刘义冰;胡大利;周雨朦;黄绮玲;潘诗云;;铜绿假单胞菌注射液对多种人恶性肿瘤细胞株的增殖抑制作用[J];中国肿瘤临床;2013年12期

10 林涛;宋纯;王辉;;晚期结直肠癌术中使用铜绿假单胞菌注射液的长期疗效探讨[J];中国肿瘤临床;2014年08期

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 王浩;铜绿假单胞菌注射液（PA-MSHA）对乳腺癌治疗作用及其机制研究[D];中南大学;2010年

2 刘哲斌;绿脓杆菌制剂对乳腺癌细胞生物学特性的影响及机制研究[D];复旦大学;2010年

3 徐闻欢;自噬抑制绿脓杆菌制剂PA-MSHA抗乳腺癌细胞增殖作用的研究[D];复旦大学;2012年

4 赵欣e，

本文编号：868626