富硒芪云抗肿瘤作用及其机制的实验研究

发布时间：2017-09-22 15:43

  本文关键词：富硒芪云抗肿瘤作用及其机制的实验研究

  更多相关文章： 富硒芪云 硒 微环境 含药血清 氧化还原

【摘要】：目的本课题研究微波消解-ICP-MS检测富硒芪云硒的含量,含药血清对体外SGC-7901细胞抑制增殖作用及Se-AMWE对体内H22腹水瘤小鼠生存时间和S180实体瘤小鼠抑瘤作用,并探讨其影响氧化还原微环境抗肿瘤机制。评价富硒芪云用于肿瘤治疗的可能性,为开发新型抗肿瘤或辅助抗肿瘤药提供合理、安全、有效的理论基础和方法学依据。方法1、富硒芪云(Se-enriched Astragalus Milk vetch water extract,Se-AMWE)按照不同比例混合后提取,使用微波消解-电感耦合等离子体质谱(Inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)检测Se-AMWE微量元素硒的含量;2、SGC-7901细胞分别在空白血清和含药血清中培养24h,显微镜下观察细胞形态;SGC-7901细胞贴壁后换用10%含药血清分别培养24h、48h和72h,台盼蓝染色观察Se-AMWE含药血清对SGC-7901细胞的蓝染率及MTT法检测观察Se-AMWE含药血清对SGC-7901细胞增殖抑制作用。3、复制H22腹水瘤小鼠模型和S180实体瘤小鼠模型,造模后分别将各模型小鼠随机分8组,模型组(等容量生理盐水)、环磷酰胺阳性对照组(cyclophosphamide,CTX)(60mg/kg)、硒酵母阳性对照组(26μg/kg)、黄芪水提物组(3.9g/kg)、紫云英水提物组(3.9g/kg)和Se-AMWE低、中、高剂量组(1.95g/kg、3.9g/kg、7.8g/kg)每组12只。另取12只KM小鼠为正常对照组(等容量生理盐水)。末次给药后,H22腹水瘤模型试验:各实验组停止给药,观察Se-AMWE对H22腹水瘤小鼠生存时间的影响。S180实体瘤模型实验:用3.5%水合氯醛腹腔麻醉小鼠,取瘤块、胸腺、胰腺、脾腺。观察Se-AMWE对S180实体瘤小鼠抑瘤率、体质量、免疫脏器指数的影响;腹主动脉取血,分离血清,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清硒结合蛋白1(Selenium-binding protein1,SBP1)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase1,GPX1)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5‘-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。结果1、Se-AMWE经微波消解仪消解后ICP-MS检测硒含量,黄芪与紫云英1:1配伍水提物中硒含量最高,平均为9.35μg/ml。2、10%含药血清培养SGC-7901细胞24h能明显改变细胞生长形态;细胞正常培养24h后,改用含药血清继续培养24h、48h和72h,与空白对照组比较,Se-AMWE含药血清组细胞蓝染率变化不明显;MTT检测发现Se-AMWE能明显抑制降低OD值、抑制细胞增殖。3、各小鼠分别用H22细胞复制腹水瘤模型和S180肿瘤细胞复制实体瘤模型,给药10天后,H22腹水瘤模型:与模型组比较,Se-AMWE各剂量组H22腹水瘤小鼠生存时间延长。S180实体瘤模型:与模型组比较,Se-AMWE各剂量组能明显抑制肿瘤组织生长,体质量没有出现明显下降,免疫脏器指数得到改善;与模型组比较,各给药组SBP1蛋白表达增多,GPX l活性提高,体内有机硒含量升高;与模型组比较,各药物组能提高AMPK水平、减少ROS含量。结论1、黄芪和紫云英按照1:1比例混合提取,提取物中硒含量最高。2、Se-AMWE含药血清能明显抑制体外SGC-7901细胞增殖。3、Se-AMWE延长H22腹水瘤小鼠的生存时间。Se-AMWE能显著抑制体内S180实体瘤细胞的增殖,提高胸腺、胰腺、脾腺等免疫系统脏器指数。各剂量组能明显增加S180小鼠血清SBP1蛋白表达,提高GPX l活性,提高AMPK水平、减少ROS含量,其机制可能与其升高肿瘤细胞中硒水平,影响肿瘤细胞能量代谢改变微环境而发挥抗肿瘤作用。
【关键词】：富硒芪云 硒 微环境 含药血清 氧化还原
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 英文缩略词（Abreviation）12-13
• 前言13-17
• 第一部分 微波消解-ICP-MS检测富硒芪云硒含量的实验研究17-20
• 1 实验材料17
• 1.1 药品及试剂17
• 1.2 主要仪器17
• 2 实验方法17-19
• 2.1 分组及药品制备17-18
• 2.2 供试品溶液的制备18
• 2.3 标准品溶液的制备18
• 2.4 内标溶液的制备18
• 2.5 ICP-MS工作参数18-19
• 3 检测结果19-20
• 3.1 线性关系考察19
• 3.2 硒含量检测19-20
• 第二部分 含药血清对胃癌细胞SGC-7901的实验研究20-29
• 1 实验材料20-22
• 1.1 细胞株20
• 1.2 动物20
• 1.3 药品20
• 1.4 主要试剂20
• 1.5 主要仪器20-21
• 1.6 主要溶液的配制21-22
• 2 实验方法22-25
• 2.1 含药血清的制备22
• 2.1.1 给药剂量计算22
• 2.1.2 受试药制备22
• 2.1.3 含药血清制备22
• 2.2 SGC-7901细胞培养22-23
• 2.2.1 传代22-23
• 2.2.2 培养23
• 2.2.3 冻存23
• 2.2.4 复苏23
• 2.3 指标检测23-25
• 2.3.1 细胞形态学观察23
• 2.3.2 细胞蓝染率测定23-24
• 2.3.3 细胞增殖抑制检测24-25
• 2.4 数据统计25
• 3 实验结果25-29
• 3.1 形态学观察25
• 3.2 细胞蓝染率检测25-26
• 3.3 细胞增殖抑制检测26-29
• 第三部分 富硒芪云对H22腹水瘤及S180实体瘤小鼠实验研究29-42
• 1 实验材料29-30
• 1.1 细胞株29
• 1.2 动物29
• 1.3 药品及试剂29
• 1.4 主要仪器29-30
• 1.5 条件30
• 2 实验方法30-34
• 2.1 药物提取30
• 2.2 细胞株传代30
• 2.3 荷瘤鼠模型的建立30-31
• 2.4 实验分组与给药31
• 2.5 动物处理及指标检测31-34
• 2.5.1 血清SBP1、GXP-1 含量的测定31-33
• 2.5.2 血清AMPK含量的测定33-34
• 2.5.3 血清ROS含量的测定34
• 2.6 统计学分析34
• 3 结果34-42
• 3.1 Se-AMWE对H22腹水瘤小鼠的生存时间的影响34-35
• 3.2 Se-AMWE对S180实体瘤小鼠的抑瘤作用35-36
• 3.3 Se-AMWE对S180实体瘤小鼠脏器指数的影响36-38
• 3.4 Se-AMWE对S180实体瘤小鼠血清SBP1含量及GXP1活性的影响38-39
• 3.5 Se-AMWE对S180实体瘤小鼠血清AMPK活性的影响39-41
• 3.6 Se-AMWE对S180实体瘤小鼠血清ROS含量的影响41-42
• 讨论42-51
• 1 中医药抗肿瘤作用机制的研究现状42-44
• 1.1 抑制肿瘤细胞增殖42-43
• 1.2 诱导肿瘤细胞凋亡43-44
• 1.3 抑制肿瘤血管生长44
• 1.4 增强机体免疫力44
• 2 硒与肿瘤44-47
• 2.1 降低化学物质的致癌作用45
• 2.2 调节转录因子45-46
• 2.3 诱导细胞凋亡46
• 2.4 抗氧化作用46-47
• 3 AMPK有关信号通路与肿瘤47-48
• 4 Se-AMWE抗肿瘤实验研究48-51
• 4.1 Se-AMWE对肿瘤细胞微环境的影响49-50
• 4.2 Se-AMWE对肿瘤细胞能量代谢的影响50-51
• 结论51-52
• 参考文献52-61
• 综述61-71
• 参考文献67-71
• 附录71-72
• 致谢72-73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张甘霖;杨国旺;于明薇;王笑民;;自噬——中医药抗肿瘤研究的新方向[J];中华中医药杂志;2014年02期

2 王萍;俞年军;尚严严;曹勇;郑太华;王韵琴;;ICP-MS法测定亳白芷中的重金属含量[J];广州化工;2015年02期

3 龙子江;张礼春;丁伯春;陈明;杨杰;穆磊;;八宝五胆药墨抗肿瘤作用及对炎症因子的影响[J];中药与临床;2013年03期

4 姜冀;宋央央;舒琦瑾;;中药在肿瘤细胞凋亡途径方面的研究进展[J];黑龙江中医药;2014年02期

5 栾爱娜;王洪新;张英杰;张素萍;鲁美丽;梅蒙;许崇华;;黄芪多糖通过调控PGC-1α抑制异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌肥厚[J];中国动脉硬化杂志;2014年06期

6 王景春;刘蔚;杨瑞玲;孙晓波;;川芎多糖对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响[J];南京中医药大学学报;2014年05期

7 谷俊朝;余微波;王宇;张忠涛;屈翔;;黄芪多糖对TA2小鼠乳腺癌MA-891移植瘤生长及HSP70表达的影响[J];中华肿瘤防治杂志;2006年20期

8 许鹏飞;孙京惠;高福云;刘国玲;;黄芪颗粒对小鼠免疫调节功能的影响[J];中国中医药信息杂志;2007年04期

9 张祥明;刘英;王允青;郑万荭;彭浩;;富硒紫云英生产富硒牛奶的研究[J];中国奶牛;2007年07期

10 章志翔;戚峰;周德俊;梁晓宇;朱理玮;王鹏志;;氟尿嘧啶联合黄芪对小鼠胃癌组织氨基酸代谢的影响[J];中华胃肠外科杂志;2006年05期

，

本文编号：901677