过表达CRMP2对弥漫性轴索损伤后α7nAChR及Aβ的影响

发布时间：2017-09-27 12:27

  本文关键词：过表达CRMP2对弥漫性轴索损伤后α7nAChR及Aβ的影响

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【摘要】：目的研究过表达脑衰反应调节蛋白2(collapsin response-mediator protein 2,CRMP2)对大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,β-APP)及β-淀粉样蛋白(amyloidβ,Aβ)表达的影响。方法1.实验动物分组:实验分为正常对照组、DAI组、AAV组及CRMP2组。正常对照组动物入组即处死。AAV组及CRMP2组分别注射空白AAV病毒和AAV-CRMP2病毒,10天后予以DAI损伤。DAI组仅致伤,不注射病毒。各损伤组大鼠分别于伤后7、14、30天处死,取标本保存待测。2.DAI大鼠模型建立:利用本课题组自行研制的DAI致伤装置建立大鼠DAI模型,该装置可通过产生复合线加速和角加速运动致伤(专利号:ZL200920067463.4、ZL 200910056452.0、ZL 201520430079.1)。3.病毒制备及注射:采用基因重组技术将CRMP2基因插入AAV表达载体,构建AAV重组质粒。通过重组AAV载体包装系统共转染HEK293细胞包装病毒,并测定病毒滴度。AAV组和CRMP2组的大鼠采用立体定向技术分别注射2ul空白AAV病毒及AAV-CRMP2病毒至右侧海马区。4.组织学研究:各组大鼠深麻醉后处死取脑,脑组织固定24小时后石蜡包埋,利用免疫荧光技术定性观察不同时间点海马组织α7n ACh R和Aβ的表达情况。5.α7n ACh R和Aβ检测:各组大鼠深麻醉后处死取脑,取右侧海马组织。采用Western blot、Real-time PCR技术定量评估α7n ACh R蛋白及m RNA的动态变化,采用Elisa方法检测Aβ蛋白的表达变化。6.统计学处理:使用SPSS 18.0软件进行统计分析,组间均数比较采用方差分析,p0.05为差异具有统计学显著性。结果1.组织学研究:α7n ACh R和Aβ在大鼠海马组织中均有表达。在免疫荧光显微镜下海马组织中α7n ACh R和Aβ免疫荧光反应呈阳性,发出红色荧光,胞核发出蓝色荧光。2.海马组织中α7n ACh R表达:与正常对照组相比,DAI组与AAV组海马组织中α7n ACh R蛋白及m RNA水平在伤后各时间点均明显降低(p0.05),但这两组之间无明显差异。CRMP2组较以上两组明显升高,具有统计学意义(p0.05),但仍低于正常组(p0.05)。3.海马组织中Aβ表达:与正常对照组相比,在伤后各时间点DAI组和AAV组海马组织中Aβ的表达均明显升高(p0.05)。但DAI组和AAV组之间无明显差异(P?0.05)。与DAI组和AAV组相比,CRMP2组Aβ的表达在损伤7、14天均明显减低(p0.05),而在损伤30天无明显差异;但DAI组、AAV组及CRMP2组Aβ的表达均高于正常组(p0.05)。结论1.大鼠DAI后海马组织内α7n ACh R表达降低,Aβ表达增加。2.大鼠DAI后过表达CRMP2可引起α7n ACh R表达升高及Aβ表达降低。
【关键词】：弥漫性轴索损伤 脑衰反应调节蛋白2 海马β-淀粉样蛋白 α7烟碱型乙酰胆碱受体
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.15
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-29
• 结果29-40
• 讨论40-43
• 结论43-44
• 参考文献44-47
• 附录A 英文缩写词一览表47-48
• 附录B 综述48-55
• 参考文献52-55
• 致谢55-56
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 孙兆良;尹义国;戚睿;徐楠杰;冯东福;;大鼠弥漫性轴索损伤后脑干内α7烟碱型乙酰胆碱受体的表达变化[J];中国临床神经外科杂志;2013年05期

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本文编号：929718