宁夏枸杞总黄酮对高糖诱导氧化应激损伤保护作用的研究

发布时间：2017-09-27 18:08

  本文关键词：宁夏枸杞总黄酮对高糖诱导氧化应激损伤保护作用的研究

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【摘要】：目的体外实验明确宁夏枸杞总黄酮(TFLB)对高糖(HG)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化应激损伤模型的保护作用;体内实验研究TFLB对链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病(DM)大鼠损伤模型的保护作用;为初步探讨TFLB对氧化应激损伤保护作用的分子机制做一些基础研究。方法1.体外培养HUVEC,采用HG诱导建立氧化应激损伤模型,实验分为正常对照组、HG损伤模型组、枸杞黄酮保护组(100、200、400 mg·L-1)、阳性对照组(维生素C)。以MTT法测定细胞存活率、试剂盒测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)释放量及活性的变化;以酶联免疫分析测定(ELISA)法测定人血管性血友病因子(v WF)、人可溶性血栓调节蛋白(s TM)、人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(s EPCR),观察TFLB对HG诱导血管内皮细胞损伤的保护作用。2.体内实验采用STZ诱导建立DM大鼠模型的方法,将成模的DM大鼠随机分为DM模型组和TFLB干预组。干预组大鼠TFLB灌胃4周,正常对照组及DM模型组大鼠予以等量生理盐水灌胃,每两周测空腹血糖一次。灌胃满4周,尾静脉采血测空腹血糖后,将大鼠麻醉,胸腔采血,测定血脂的变化;ELISA法测定大鼠v WF、s TM、s EPCR变化;摘取胰腺、主动脉组织进行HE染色和免疫组化,观察TFLB对DM大鼠脏器超微结构的影响及病理生理变化的改善功效。结果1.TFLB对HG诱导建立HUVEC氧化应激损伤模型的保护作用(体外实验)。(1)成功建立了HG诱导的HUVEC损伤模型,确定了HG的造模浓度为40mmol L-1,损伤时间为48小时。(2)TFLB干预后,与HG损伤模型组相比较,枸杞黄酮干预组MDA释放量明显降低、LDH释放量及活性下降,SOD的活性明显增高,NO、NOS生成量及活性明显增高,具有显著性差异(P0.05,P0.01),在一定浓度范围内与TFLB呈剂量依赖性关系。(3)TFLB干预后,与HG损伤模型组相比较,枸杞黄酮干预组s TM含量呈现下降趋势;各枸杞黄酮干预组的v WF、、s EPCR含量明显下降,差异具有显著性(P0.05,P0.01)。2.TFLB对STZ诱导建立糖尿病(DM)大鼠损伤模型保护作用(体内实验)。(1)TFLB干预后可以延缓、推迟血糖升高的进程,对血脂有明显降低趋势。(2)TFLB干预后,与DM模型组相比较,各TFLB干预组v WF、s TM、s EPCR含量均呈下降趋势,差异具有显著性(P0.05,P0.01)。(3)TFLB干预后,与DM模型组相比较,随TFLB剂量的升高,大鼠胰岛数量及岛内分泌细胞数有所增多,细胞排列相对均匀规整,胰岛结构、形态基本趋于正常,细胞空泡变性相对较少。(4)TFLB干预后,与DM模型组相比较,低剂量TFLB干预组大鼠主动脉内膜仍见明显增厚,且有山峦样突起,血管形态改变,粗细不均,部分可见斑块,外膜有轻度损伤,内皮细胞增生,排列仍不规整;高剂量TFLB干预组大鼠主动脉内膜有轻度增厚,内皮细胞轻度增生、排列尚规整,外膜未见明显损伤。结论1.TFLB对HG诱导的HUVEC损伤模型干预后,提高了HUVEC中抗氧化酶(SOD)的活性,增加NO、NOS的释放量及活性,降低了MDA和LDH的释放量,下调了血管内皮功能相关因子v WF、s TM、s EPCR的含量,实现对血管内皮细胞的保护作用,初步作用机制可能与宁夏枸杞总黄酮抗自由基,保护内皮细胞线粒体,减轻高糖所致的脂质氧化有关。2.TFLB对STZ诱导的DM模型干预后,能明显保护DM大鼠胰岛功能,改善大鼠胰岛素抵抗,延缓血糖升高速度,调节血脂代谢紊乱,进而推迟DM病程进展,减轻高血糖对心血管内皮细胞损伤,起到保护心血管系统作用。
【关键词】：枸杞总黄酮 人脐静脉内皮细胞 糖尿病大鼠 高糖 氧化应激
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 符号说明10-13
• 前言13-16
• 第一部分 宁夏枸杞总黄酮对高糖诱导损伤人脐静脉内皮细胞保护作用的研究16-28
• 材料与方法16-21
• 结果21-25
• 讨论25-27
• 结论27-28
• 第二部分 宁夏枸杞总黄酮对STZ诱导的DM大鼠保护作用的研究28-48
• 材料与方法28-34
• 结果34-42
• 讨论42-47
• 结论47-48
• 全文总结与展望48-49
• 参考文献49-53
• 综述53-62
• 参考文献59-62
• 攻读学位期间发表的论文62-63
• 致谢63-64
• 个人简历64

【参考文献】

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本文编号：931135