苓甘五味姜辛汤对寒饮伏肺型哮喘大鼠cAMP-PKA通路相关分子表达的影响

发布时间：2017-09-29 20:21

  本文关键词：苓甘五味姜辛汤对寒饮伏肺型哮喘大鼠cAMP-PKA通路相关分子表达的影响

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【摘要】：目的:本课题采用寒冷刺激加卵蛋白腹腔注射和雾化吸入的方法建立寒饮伏肺型哮喘大鼠模型,观察苓甘五味姜辛汤对寒饮伏肺型哮喘大鼠肺组织病理变化及cAMPPKA信号通路相关基因和蛋白的影响,从而阐明苓甘五味姜辛汤治疗寒饮伏肺型哮喘的作用机理。方法:将90只大鼠称重,用随机数字表法分为空白组、模型组、苓甘五味姜辛汤高、中、低剂量组及西药组,每组15只。空白组以PBS溶液代替OVA致敏和雾化吸入激发,其余各组均采用寒冷刺激加卵蛋白腹腔注射和雾化吸入的方法建立寒饮伏肺型哮喘大鼠模型,待模型制备成功后,空白组和模型组灌胃NS,中药各组灌胃相应浓度的苓甘五味姜辛汤,西药组灌胃地塞米松,每日灌胃1次,并连续27d。末次灌胃24 h后,给大鼠腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后并固定小鼠后,股动脉取血离心后冻存;剖开胸腔,然后迅速结扎并取出右肺,存于-80℃冰箱冰冻保存,以便用于抽提mRNA和提取蛋白用于RT-qPCR和Western blot等技术检测。结果:1.与空白组比较,各治疗组大鼠和模型组光镜下观察肺组织均有不同程度的气道损伤和炎症细胞浸润的炎症改变。给予苓甘五味姜辛汤治疗后与模型组比较,各治疗组的大鼠肺组织病理切片评分均降低,有统计学意义(P0.05);2.与空白组比较,模型组大鼠血清cAMP、PKA、AQP5、CREB含量明显降低(P0.05);经过药物治疗后,各治疗组与模型组比较,大鼠中血清cAMP、PKA、AQP5、CREB含量均升高(P0.05),且苓甘五味姜辛汤高剂量组和西药组作用最显著(P0.05);3.与空白组比较,模型组大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREBmRNA表达量明显降低(P0.05);各治疗组与模型组比较,大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREB mRNA表达量均升高(P0.05),且苓甘五味姜辛汤高剂量组和西药组作用最显著(P0.05);4.与空白组比较,模型组大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白相对表达量明显降低(P0.05);各治疗组与模型组比较,大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白相对表达量升高(P0.05),且苓甘五味姜辛汤高剂量组和西药组作用最显著(P0.05)。结论:1.本研究寒饮伏肺型哮喘大鼠模型复建成功,并且苓甘五味姜辛汤可以通过调节气道液体分泌、减轻炎症反应进而起到治疗寒饮伏肺型哮喘的作用;2.cAMP、PKA、AQP5、CREB基因和蛋白的表达水平与寒饮伏肺型哮喘病情的活动性和严重程度有一定的相关性,说明寒饮伏肺型哮喘大鼠肺组织中cAMP、PKA、AQP5、CREB的表达水平能够反映肺组织的损伤程度,进而推断出cAMP、PKA、AQP5、CREB的表达水平对哮喘病情的评估及治疗后的效果判定可能存在潜在的指导意义;3.苓甘五味姜辛汤的治疗作用可能与上调cAMP、PKA、AQP5、CREB基因的表达水平,增加气道液体分泌的作用有关。提示cAMP、PKA、AQP5、CREB的基因位点可能是苓甘五味姜辛汤治疗寒饮伏肺型哮喘的关键靶位;4.苓甘五味姜辛汤对寒饮伏肺型哮喘大鼠cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白的表达具有上调作用,进而可以减轻气道炎症反应,治疗寒饮伏肺型哮喘。提示苓甘五味姜辛汤对寒饮伏肺型哮喘的治疗作用与上调cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白表达水平有关。
【关键词】：苓甘五味姜辛汤 寒饮伏肺型哮喘 cAMP PKA AQP5
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英文缩略词表10-11
• 前言11-13
• 第一部分 实验研究13-46
• 1.技术路线图13-14
• 2 实验材料14-15
• 2.1 实验动物14
• 2.2 药物与试剂14-15
• 2.3 主要实验仪器15
• 3 实验方法15-23
• 3.1 动物分组与造模15
• 3.2 给药15-16
• 3.3 标本采集16-17
• 3.3.1 股动脉取血16
• 3.3.2 肺组织保存16-17
• 3.4 标准的制备与检测17-22
• 3.4.1 病理切片的制备17
• 3.4.2 采用双抗体夹心ELISA法测定cAMP、PKA、AQP5、CREB含量17
• 3.4.3 采用RT-qPCR法检测大鼠肺组织中cAMP、PKA、AQP5、CREB的水平及表达17-20
• 3.4.4 采用Western bolt法检测cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白相对量的表达20-22
• 3.5 统计方法22-23
• 4 实验结果23-34
• 4.1 一般情况23
• 4.2 大鼠肺组织光镜下形态学变化（见附图）及病理评分23-25
• 4.3 各组大鼠血清cAMP、PKA、AQP5、CREB的水平25-28
• 4.4 各组大鼠肺组织cAMP、PKA、AQP5、CREB的基因表达28-31
• 4.5 各组大鼠肺组织cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白相对量的表达31-34
• 5 讨论34-41
• 5.1 cAMP-PKA信号通路与哮喘34-36
• 5.2 寒饮伏肺型哮喘的理论探讨36-37
• 5.3 苓甘五味姜辛汤的组方分析37-38
• 5.4 与小青龙汤的比较38-39
• 5.5 模型制备的方法选择39-41
• 结语41-42
• 参考文献42-44
• 附录44-46
• 第二部分 文献综述46-61
• 1 现代医学对哮喘的认识46-49
• 1.1 哮喘46
• 1.2 发病机制研究46-47
• 1.3 治疗情况47-48
• 1.4 哮喘急性发作期的治疗48-49
• 1.5 哮喘的长期治疗49
• 2 中医学对支气管哮喘的认识49-52
• 2.1 概述49
• 2.2 哮喘的病因病机49-50
• 2.3 哮喘的辨证论治50-52
• 3 苓甘五味姜辛汤近5年研究概况52-57
• 3.1 概述52-53
• 3.2 实验研究53-54
• 3.3 临床研究54-55
• 3.4 小结55-57
• 参考文献57-61
• 致谢61-62
• 在学期间主要研究成果62

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本文编号：944052