精索静脉曲张（VC）大鼠及其手术治疗后睾丸附睾组织中miR-210和HIF-1α的表达及意义

发布时间：2017-10-03 18:42

  本文关键词：精索静脉曲张（VC）大鼠及其手术治疗后睾丸附睾组织中miR-210和HIF-1α的表达及意义

  更多相关文章： 精索静脉曲张 大鼠 miR-210 HIF-1α 睾丸 附睾 损伤

【摘要】：目的:通过研究mi R-210和HIF-1α(缺氧诱导因子-1α)蛋白在精索静脉曲张大鼠的睾丸、附睾组织中的表达情况及精索静脉高位结扎术后改善情况。分析各组大鼠睾丸、附睾组织中mi R-210和HIF-1α蛋白表达情况及相互关系。同时优化手术造模和精索静脉曲张高位结扎手术方法。探讨精索静脉曲张高位结扎手术的意义,探讨mi R-210和HIF-1α在大鼠精索静脉曲张致睾丸附睾损伤中可能的分子机制,探讨mi R-210和HIF-1α是否能成为预测精索静脉曲张手术指征和预后的指标。方法:1.选取7周龄(青春期)雄性SD(Sprague-Dawl)大鼠21只,饲养1周后随机分为假手术组(7只)、曲张组(7只)和治疗组(7只)。曲张组和治疗组大鼠麻醉后上腹部正中切口显微镜下缩窄左肾静脉和左下腹部切口结扎左精索静脉与左髂总静脉间的交通支;假手术组大鼠手术操作过程与曲张组相同,但不实施缩窄和结扎操作,单纯关闭手术切口,在相同条件下饲养8周;造模术后8周,在麻醉下测量假手术组和曲张组大鼠的精索静脉直径,切除左侧睾丸(称重)和附睾,一部分睾丸附睾进行甲醛固定,其余冻存(-80℃)备用;治疗组大鼠在麻醉后显微镜下进行左精索静脉高位结扎术,继续原条件饲养4周,4周后测量精索静脉直径和睾丸重量、留取标本同假手术组和曲张组。将甲醛固定睾丸附睾组织进行HE染色,观察睾丸附睾损伤情况。2.切取睾丸组织和附睾头部组织,使用mic RNA提取试剂盒提取mic RNA,反转成c DNA后再进行real-time PCR测定mi R-210的表达情况;通过蛋白提取试剂盒提取蛋白,然后进行蛋白印迹(WB),测定HIF-1α蛋白表达情况。3.分析各组睾丸附睾组织mi R-210和HIF-1α的表达情况,以及分析各组睾丸附睾组织mi R-210和HIF-1α两者之间的相关性。结果:1.每组最终各5只大鼠;病理切片显示:曲张组和假手术组相比生精小管内生精细胞数量减少、分布不均匀及炎细胞浸润,无成熟精子,附睾管上皮细胞减少、成熟精子数量减少,治疗组较曲张组明显改善;精索静脉直径:曲张组和治疗组(结扎术前)比假手术组明显增粗(P0.01),且差异均有统计学意义。2.睾丸重量:曲张组比假手术组重量减轻,治疗组比假手术组减轻(P0.01),两者均有统计学意义;治疗组比曲张组重量增加(P0.05),但是无统计学意义。3.睾丸和附睾组织中mi R-210和HIF-1α的表达情况:睾丸组织mi R-210和HIF-1α的表达,曲张组比假手术组相对量均增加,治疗组比曲张组相对含量均减少(P0.01),且均有统计学意义;假手术组与治疗组相比变化不明显(P0.05),均无统计学意义;各组附睾组织mi R-210和HIF-1α的表达差异与睾丸组织一致。4.睾丸和附睾组织mi R-210和HIF-1α之间的关联性:相关性分析结果显示两者之间均呈正相关。结论:1.精索静脉曲张可引起大鼠睾丸退行性损伤,生精功能异常,重量减小,附睾管上皮细胞减少、成熟精子数量减少;精索静脉增粗。精索静脉高位结扎术后,睾丸的损伤得到修复,生精功能改善,重量增加但不明显,附睾精子成熟功能得到改善;精索静脉萎缩。2.精索静脉曲张导致左侧睾丸和附睾组织mi R-210和HIF-1α表达量均增加;精索静脉曲张高位结扎术后睾丸和附睾组织mi R-210和HIF-1α表达量均降低,二者呈正相关。3.精索静脉曲张大鼠睾丸附睾组织中mi R-210和HIF-1α的表达增加,并且mi R-210和HIF-1α表达呈正相关,推测两者可能是精索静脉曲张导致睾丸附睾损伤的分子机制之一,有望成为预测精索静脉曲张手术指征和预后的指标。
【关键词】：精索静脉曲张 大鼠 miR-210 HIF-1α 睾丸 附睾 损伤
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R699.8
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-16
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、大鼠左侧精索静脉曲张模型的建立和精索静脉曲张高位结扎术16-30
• 1.1 对象和方法16-18
• 1.1.1 实验对象16
• 1.1.2 主要试剂和耗材16
• 1.1.3 主要仪器16
• 1.1.4 试验方法16-18
• 1.1.5 术后观察及指标18
• 1.1.6 统计分析18
• 1.2 结果18-23
• 1.2.1 造模结果18-22
• 1.2.2 睾丸重量22-23
• 1.3 讨论23-29
• 1.3.1 VC动物模型23-27
• 1.3.2 VC治疗27-28
• 1.3.3 VC病理改变28-29
• 1.4 小结29-30
• 二、精索静脉曲张大鼠睾丸附睾组织中mi R-210的表达情况30-40
• 2.1 对象和方法30-34
• 2.1.1 试验对象30
• 2.1.2 主要试剂30
• 2.1.3 主要仪器30
• 2.1.4 实验前仪器处理30-31
• 2.1.5 试验方法31-34
• 2.1.6 统计分析34
• 2.2 结果34-36
• 2.2.1 睾丸mi R-210表达34-35
• 2.2.2 附睾mi R-210表达35-36
• 2.3 讨论36-39
• 2.4 小结39-40
• 三、精索静脉曲张大鼠睾丸附睾组织中HIF-1α 蛋白的表达情况40-54
• 3.1 对象和方法40-43
• 3.1.1 试验对象40
• 3.1.2 主要试剂和耗材40
• 3.1.3 主要仪器40-41
• 3.1.4 试验方法41-42
• 3.1.5 统计分析42-43
• 3.2 结果43-45
• 3.2.1 睾丸HIF-1α 表达43
• 3.2.2 附睾HIF-1α 表达43-44
• 3.2.3 睾丸组织miR-210和HIF-1α 的关联性44
• 3.2.4 附睾组织miR-210和HIF-1α 的关联性44-45
• 3.3 讨论45-49
• 3.3.1 HIF-1α 调节缺氧相关的机制45-48
• 3.3.2 HIF-1α 与精索静脉曲张睾丸附睾损伤的关系48-49
• 3.4 小结49-50
• 3.5 全文总结50-54
• 结论54-55
• 参考文献55-61
• 发表论文和参加科研情况说明61-62
• 附录62-67
• 综述 mi R-210和HIF-1α 与精索静脉曲张不育的关系67-77
• 综述参考文献73-77
• 致谢77-78
• 个人简历78

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