小型猪复合麻醉剂及其颉颃剂对大鼠不同脑区LKB1影响的研究

发布时间：2017-10-08 11:20

  本文关键词：小型猪复合麻醉剂及其颉颃剂对大鼠不同脑区LKB1影响的研究

  更多相关文章： 小型猪 麻醉 XFM 颉颃剂 交互作用机制 LKB1

【摘要】：小型猪复合麻醉剂(XFM)及其颉颃剂具有效果确实、安全、副作用小及使用方便的特点,但其麻醉和催醒机理尚不完全清楚。随着对于细胞信号通路的研究不断深入,寻找明确的药物作用靶位,探寻关键的作用机制一直是全麻机理和催醒机理研究的重点。而在中枢神经系统里面存在着非常复杂的信号转导网络,可谓纷繁复杂。其中,LKB1可以磷酸化诸多保守的下游激酶,就是一个很好的代表,AMPK家族属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,LKB1通过磷酸化AMPK而激活AMPK,负向调节mTOR的活性,即LKB1-AMPK-mTOR信号传导通路。LKB1/AMPK/m TOR通路可在细胞增殖、生长、分化等过程中起着中心调控点的作用,在长时程调节(麻醉时间长短)及树突的兴奋性调节中,LKB1起到了重要作用,特别是参与局部蛋白质的合成与神经元可塑性密切相关。这可能就是全麻药物及其颉颃剂在中枢神经系统发挥作用的关键靶位点和作用途径之一。为准确地了解XFM及其颉颃剂对中枢高级神经系统生理活动的影响,本实验选取LKB1-AMPK-mTOR信号传导通路中的关键蛋白LKB1及其转录因子为研究对象,阐明XFM及其颉颃剂对大鼠不同脑区LKB1基因和蛋白的影响,并从分子水平对XFM及其颉颃剂交互作用机制进行探讨,为进一步研究LKB1-AMPK-mTOR信号转导系统在中枢神经系统中的作用奠定基础。本实验将90只SD大鼠随机分为XFM麻醉组(M组)、小型猪复合麻醉颉颃剂组(J组)、XFM与颉颃剂交互组(MJ组)。M组随机分为5个亚组,分别为M1组(腹腔注射XFM 10 min后)、M2组(腹腔注射XFM 20 min后)、M3组(腹腔注射XFM 40 min后)、M4组(腹腔注射XFM 60 min后)、C1组(腹腔注射与M组等剂量的生理盐水);J组随机分为5个亚组,分别为J1组(腹腔注射颉颃剂10 min后)、J2组(腹腔注射颉颃剂20 min后)、J3组(腹腔注射颉颃剂40 min后)、J4组(腹腔注射颉颃剂60 min后)、C2组(腹腔注射与J组等剂量的生理盐水);MJ组随机分为4个亚组,分别为MJ1组(腹腔注射XFM10 min后再腹腔注射颉颃剂10 min后)、MJ2组(腹腔注射XFM 10 min后再腹腔注射颉颃剂20 min后)、MJ3组(腹腔注射XFM 10 min后再腹腔注射颉颃剂40 min后)、MJ4组(腹腔注射XFM 10 min后再腹腔注射颉颃剂60 min后)、C3组(分两次腹腔注射与MJ组等剂量的生理盐水)。以上每个亚组6只。各亚组大鼠到达预定时间点后断颈处死,取脑,并分离大脑皮层、海马、小脑、丘脑和脑干部位。采用RT-PCR方法检测各脑区中LKB1m RNA的相对转录含量,用Western blot方法检测各脑区中LKB1和磷酸化LKB1(pLKB1)蛋白的相对表达量。实验结果表明:(1)小型猪复合麻醉剂(XFM)能够明显升高大鼠脑内大脑皮层、海马、小脑、丘脑和脑干的LKB1 m RNA相对转录量、降低大脑皮层、小脑LKB1和p-LKB1蛋白的相对表达量,升高海马、丘脑和脑干p-LKB1蛋白的相对表达量,这些可能是XFM产生麻醉作用的位点。(2)小型猪复合麻醉颉颃剂能够降低大鼠脑内大脑皮层、海马、小脑、丘脑和脑干的LKB1 mRNA相对转录量、降低大脑皮层和小脑的LKB1和p-LKB1蛋白的相对表达量(3)小型猪复合麻醉颉颃剂催醒XFM麻醉的大鼠后,能够有效完全的逆转大鼠脑内小脑和脑干的LKB1 mRNA相对转录量、LKB1和p-LKB1蛋白的相对表达量,部分逆转丘脑内的LKB1 m RNA相对转录量、LKB1和p-LKB1蛋白的相对表达量,这些可能是其发挥催醒作用的位点之一。综上所述,小型猪复合麻醉剂(XFM)及其颉颃剂对大鼠部分脑区LKB1具有相反作用,这可能是它们产生麻醉和催醒作用的交互机制之一,但颉颃剂不能全部完全逆转XFM对大鼠脑内LKB1的作用,可能有其它相关机制产生作用,LKB1因子所作用的LKB1-AMPK-mTOR通路影响可能只是其中之一。
【关键词】：小型猪 麻醉 XFM 颉颃剂 交互作用机制 LKB1
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.7
【目录】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 1 引言12-24
• 1.1 麻醉概述12-13
• 1.1.1 麻醉概念12
• 1.1.2 麻醉分类12
• 1.1.3 麻醉起源与发展12-13
• 1.2 全身麻醉概述13-17
• 1.2.1 药物作用靶位研究13-14
• 1.2.2 全身麻醉机制研究进展14-17
• 1.3 动物麻醉概述17-20
• 1.3.1 动物麻醉概念17
• 1.3.2 动物麻醉分类17
• 1.3.3 动物麻醉药物相关研究进展17-19
• 1.3.4 小型猪复合麻醉剂（XFM）与颉颃剂研究19-20
• 1.4 LKB1概述20-23
• 1.4.1 LKB1简介20
• 1.4.2 LKB1基因及蛋白功能20-21
• 1.4.3 LKB1研究进展21-23
• 1.5 研究目的与意义23-24
• 2 实验材料与方法24-36
• 2.1 实验材料24-26
• 2.1.1 实验动物24
• 2.1.2 实验仪器24
• 2.1.3 实验试剂24-26
• 2.1.4 实验药品26
• 2.2 实验方法26-34
• 2.2.1 实验动物分组及处置26-27
• 2.2.2 实验动物样品采集27
• 2.2.3 不同脑区LKB1mRNA含量的测定27-30
• 2.2.4 不同脑区LKB1和p-LKB1蛋白的测定30-34
• 2.3 数据处理与分析34-36
• 2.3.1 基因数据处理34
• 2.3.2 蛋白数据处理34-35
• 2.3.3 统计学分析35-36
• 3 实验结果36-53
• 3.1 XFM及其颉颃剂对大鼠不同脑区LKB1 MRNA含量的影响36-41
• 3.1.1 RNA浓度测定36
• 3.1.2 样品总RNA完整性检验36
• 3.1.3 RT-PCR检测条件结果36-38
• 3.1.4 XFM对大鼠不同脑区LKB1 mRNA含量的影响38-39
• 3.1.5 小型猪复合麻醉颉颃剂对大鼠不同脑区LKB1 mRNA含量的影响39-40
• 3.1.6 XFM及其颉颃剂交互作用对大鼠不同脑区LKB1 mRNA含量的影响40-41
• 3.2 XFM及其颉颃剂对大鼠不同脑区LKB1和P-LKB1蛋白含量的影响41-53
• 3.2.1 Western blot方法检测条件结果41-42
• 3.2.2 XFM对大鼠不同脑区LKB1蛋白含量的影响42-44
• 3.2.3 XFM对大鼠不同脑区p-LKB1蛋白含量的影响44
• 3.2.4 小型猪复合麻醉颉颃剂对大鼠不同脑区LKB1蛋白含量的影响44-46
• 3.2.5 小型猪复合麻醉颉颃剂对大鼠不同脑区p-LKB1蛋白含量的影响46-48
• 3.2.6 XFM及其颉颃剂交互作用对大鼠不同脑区LKB1蛋白含量的影响48-50
• 3.2.7 XFM及其颉颃剂交互作用对大鼠不同脑区p-LKB1蛋白含量的影响50-53
• 4 讨论53-62
• 4.1 实验总体设计53-56
• 4.1.1 实验思路确立53-54
• 4.1.2 实验因素控制54
• 4.1.3 实验方法确立54-56
• 4.2 XFM及其颉颃剂与LKB1的关系56-59
• 4.2.1 XFM及其颉颃剂对LKB1 mRNA表达的影响56-57
• 4.2.2 XFM及其颉颃剂对LKB1蛋白表达的影响57-58
• 4.2.3 XFM及其颉颃剂对P-LKB1蛋白表达的影响58-59
• 4.3 全身麻醉与催醒过程中LKB1作用机制探讨59-62
• 5 结论62-63
• 致谢63-64
• 参考文献64-71
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文71

，

本文编号：993735