维生素D受体对糖尿病肾病小鼠蛋白尿的影响

发布时间：2017-10-10 13:35

  本文关键词：维生素D受体对糖尿病肾病小鼠蛋白尿的影响

  更多相关文章： 糖尿病肾病 db/db小鼠 VDR 蛋白尿 GSK-3β β-catenin

【摘要】：背景:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)已成为终末期肾病的主要病因[1]。蛋白尿是DN患者最突出的临床表现。其发病机制复杂,目前尚无有效的治疗方法[2]。目前国际上主要观点认为:DN是一种“足细胞病”[3,4]。维生素D受体(VDR)广泛分布于人体,包括骨骼、肾脏、皮肤、甲状旁腺、乳腺等体内多数组织、器官[5]。维生素D(VD)-VDR信号系统具有调控基因表达、钙磷代谢、细胞迁移和分化、免疫反应等多种作用[6]。有研究报道VDR在长期慢性肾脏疾病、终末期肾脏病及长期糖尿病导致的微炎症状态的患者体内有表达量减少的趋势[7,8];利用VDRA(维生素D受体激动剂,vitamin D receptor agonist)可部分缓解DN动物模型的蛋白尿等等[9]。但是关于VDR与糖尿病肾病蛋白尿之间的关系,相关研究较少。Wnt/β-catenin信号通路参与机体细胞的生长、增殖、分化等多个生理过程[10,11,12]。研究发现VD-VDR信号系统对Wnt/β-catenin信号通路具有调节作用[13]。对于Wnt信号通路及其关键分子GSK-3β/β-catenin,未见有关VDR在DN中对其调控的相关报道。目的:1.在糖尿病肾病模型db/db小鼠中检测肾组织中VDR的表达水平及与蛋白尿量的关系;2.在小鼠肾组织中验证VDR对Wnt信号通路关键分子GSK-3β、β-catenin的调控作用;3.利用VDR激动剂帕立骨化醇观察VDR在动物模型中对高糖导致的足细胞和肾损伤的保护作用。方法:随机将5周龄db/db小鼠分为3组:db/db组,db/db-二甲基亚砜组(db/db-D组),db/db-帕立骨化醇治疗组(db/db-P组),每组各20只;db/m小鼠20只作为正常对照组(n=20)。从6周起开始收集血、尿标本,检测血糖、血肌酐、尿蛋白量,与db/m小鼠的相应数据对比。于10周时作如下药物干预:db/db-P组隔日给予帕立骨化醇0.3μg/kg腹腔注射,db/db-D组注射与db/db-P组等体积的溶剂,db/m组和db/db组不给予任何处理。分别于注射前、注射后1月、2月、3月时(即10周、14周、18周、22周)每组各处死5只,取肾组织实时荧光定量PCR(q RT-PCR)、Wetern blot检测VDR、nephrin、podocin、GSK-3β、β-catenin、α-SMA、MMP9的表达量;并制备病理和电镜切片,观察肾组织结构的变化及足细胞的形态,免疫组化检测nephrin、β-catenin的表达;免疫荧光检测VDR、podocin、α-SMA的表达。结果:1.随周龄增加,db/db小鼠体重、血糖、尿蛋白及血肌酐明显升高(P0.05),给予帕立骨化醇治疗后尿蛋白、血肌酐水平降低(P0.05),而对体重、血糖无明显影响。肾组织中VDR的蛋白和m RNA表达量下调(P0.05),Pearson相关分析发现VDR和尿蛋白呈负相关(r=-0.745,P0.01)。2.随周龄增加,db/db小鼠肾组织中VDR的蛋白和m RNA表达量减少(P0.05),GSK-3β、β-catenin的蛋白和m RNA表达增多(P0.05);给予帕立骨化醇后,VDR的蛋白和m RNA表达量上调,GSK-3β、β-catenin的蛋白和m RNA表达量减少(P0.05),说明VDR对Wnt信号通路关键分子GSK-3β、β-catenin有调控作用。3.随周龄增加,db/db小鼠肾组织中nephrin、podocin的蛋白和m RNA表达量减少(P0.05),而α-SMA、MMP9的蛋白和m RNA表达增多(P0.05),给予帕立骨化醇激动VDR后nephrin、podocin的蛋白和m RNA表达上调(P0.05),α-SMA、MMP9的蛋白和m RNA表达下调(P0.05),说明VDR对糖尿病肾病小鼠的足细胞和肾脏损伤有保护作用。结论:VDR可通过调控Wnt信号通路关键分子GSK-3β、β-catenin,保护糖尿病肾病小鼠损伤的足细胞和肾脏,进而减少蛋白尿。
【关键词】：糖尿病肾病 db/db小鼠 VDR 蛋白尿 GSK-3β β-catenin
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 中英文对照缩略词11-12
• 引言12-14
• 材料和方法14-28
• 实验结果28-43
• 讨论43-47
• 结论47-48
• 参考文献48-53
• 综述 糖尿病肾病53-68
• 参考文献63-68
• 个人简历及在校期间发表的学术论文68-69
• 致谢69

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本文编号：1006695