肌成纤维细胞自噬趋势对肾组织损伤的影响

发布时间：2017-10-24 23:13

  本文关键词：肌成纤维细胞自噬趋势对肾组织损伤的影响

  更多相关文章： 肾间质纤维化 自噬 肌成纤维细胞 单侧输尿管梗阻 α-SMA LC-3

【摘要】：目的:通过观察UUO大鼠肾脏肌成纤维细胞自噬相关蛋白α-SMA、LC-3的表达,探讨肌成纤维细胞自噬趋势对早期肾组织损伤的影响。方法:采用单侧输尿管结扎方法建立肾组织损伤模型,实验动物为72只健康雄性SD大鼠,体重110±20g,,随机分为三组:假手术组(手术分离但不结扎左侧输尿管),模型组(手术分离并结扎输尿管近肾盂段)及治疗组(输尿管结扎后用雷帕霉素治疗)。造模成功后,分别于3,7,10,14天在各组中随机处死6只大鼠,行Masson染色动态观察各组梗阻侧肾组织损伤程度,免疫组织化学染色法检测各组α-SMA、LC-3在肾组织的表达及分布变化。结果:(1)Masson染色显示假手术组肾组织无明显病理变化;模型组可见肾小管上皮肿胀,炎性细胞增多浸润,肾间质中深蓝色阳性染色面积明显可见,梗阻时间越长越明显,各时间点比较有显著差异(P0.01)。雷帕霉素治疗组也可见肾小管上皮肿胀,炎性细胞增多浸润,但肾间质中深蓝色阳性染色面积在各时间点较模型组明显减少(P0.01),但仍多于假手术组(P0.01)。(2)免疫组织化学方法检测肾脏中α-SMA、LC-3的表达:假手术组:肾脏α-SMA蛋白表达于血管平滑肌细胞胞浆,余肾脏细胞无表达,各时间点无明显差异(P0.05);而肾脏血管平滑肌细胞、肾小管上皮细胞、足细胞等处可见LC-3蛋白表达。模型组:随着梗阻时间的延长,逐渐于肾间质、肾小管上皮细胞、肾小球系膜区可见α-SMA蛋白表达且表达水平逐渐升高;LC-3蛋白在肾脏表达部位与假手术组大致相同,但在肾间质、肾小管上皮细胞、肾小球系膜处表达水平明显高于假手术组,各时间点比较差异显著(P0.01)。雷帕霉素治疗组:α-SMA,LC-3表达部位、趋势同模型组,α-SMA表达水平低于模型组,LC-3则高于模型组(P0.01),但两者表达水平均高于同时间点假手术组。结论:肾梗阻早期,肌成纤维细胞自噬水平显著增加,提示梗阻早期肌成纤维细胞自噬水平明显增高;雷帕霉素干预后,α-SMA表达减少,LC-3表达增多,提示肌成纤维细胞表达减少但其自噬水平增强,说明雷帕霉素可增强肌成纤维细胞自噬活性,肌成纤维细胞自噬增强可在一定程度上减少肌成纤维细胞过度生成,进一步减轻肾组织损伤,延缓肾脏疾病的进展;假手术组α-SMA、LC-3表达随梗阻时间延长未发生明显变化,说明肌成纤维细胞在正常生理状态下也发生自噬现象,受到应激时可通过增强自身自噬活性产生自我保护,对抗因梗阻造成的损伤。
【关键词】：肾间质纤维化 自噬 肌成纤维细胞 单侧输尿管梗阻 α-SMA LC-3
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692
【目录】：

• 摘要6-8
• abstract8-11
• 缩略词表11-13
• 前言13-14
• 材料和方法14-18
• 1.1 实验动物14
• 1.2 实验试剂及用药14
• 1.3 实验仪器14
• 1.4 UUO模型（单侧输尿管结扎模型）制备方法14-15
• 1.5 实验分组及干预治疗15
• 1.6 实验标本收集15
• 1.7 Masson染色的步骤15-16
• 1.8 免疫组化染色方法16-17
• 1.8.1 α-SMA免疫组化染色方法16
• 1.8.2 LC-3 免疫组化染色方法16-17
• 1.9 诊断标准17
• 1.10 统计学处理17-18
• 结果18-22
• 2.1 大鼠一般情况18
• 2.2 Masson染色半定量结果分析18-19
• 2.3 免疫组化结果分析19-22
• 2.3.1 α-SMA免疫组化结果分析19-20
• 2.3.2 LC-3 免疫组化结果分析20-22
• 讨论22-26
• 结论26-27
• 参考文献27-29
• 综述29-37
• 1 自噬29-31
• 1.1 概念及分类29-30
• 1.2 自噬形成机制30
• 1.3 自噬的调控机制30-31
• 2 自噬与肾脏细胞31-32
• 2.1 自噬与肾小管上皮细胞31
• 2.2 自噬与肾小球系膜细胞31
• 2.3 自噬与足细胞31-32
• 2.4 自噬与肌成纤维细胞32
• 3 自噬在与肾脏纤维化有关的肾脏疾病的关系32-33
• 3.1 自噬与肾间质纤维化32
• 3.2 自噬与糖尿病肾病32-33
• 3.3 自噬与肾小球硬化病33
• 4 结语33-34
• 参考文献34-37
• 附图37-40
• 致谢40-41
• 个人简历41

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本文编号：1090971