MicroRNA-126在肾透明细胞癌中的表达以及对细胞株786-O生物学行为的影响

发布时间：2017-10-27 21:12

  本文关键词：MicroRNA-126在肾透明细胞癌中的表达以及对细胞株786-O生物学行为的影响

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【摘要】：目的:研究人肾透明细胞癌与癌旁正常肾组织中mi RNA-126的表达情况,分析mi RNA-126的表达与肾癌病理分级、临床分期之间存在的相关性。研究mi RNA-126影响肾癌细胞生物学行为的机制。方法:1.通过real-time q PCR的方法检测30例cc RCC及癌旁正常肾组织中mi RNA-126的表达情况,研究mi RNA-126表达与cc RCC患者的病理分级和临床分期的关系。2.运用real-time q PCR的方法检测肾癌细胞株786-O和人肾小管上皮细胞株HK-2中mi RNA-126的表达;应用Lipofectamine RNAi MAX转染has-mir-126-5p于肾癌细胞株786-O,上调其表达,实时定量PCR方法检测其表达情况,并通过MTT、Transwell侵袭实验、Annexin V/PI双染法分别观察转染后细胞在增殖、侵袭力和凋亡方面的变化。结果:1.30例cc RCC组织和癌旁组织中,cc RCC组织中mi RNA-126的相对表达量明显低于癌旁组织中的相对表达量,癌旁为癌组织表达倍数最大为15.49,最小为0.37,存在显著差异(P0.05)。30例cc RCC标本根据病理分级进行分组,mi RNA-126在高分化组中表达的相对含量为36.63±5.38,中、低分化组为19.96±7.28,没有显著差异(P0.05)。在不同临床分期的样本中,Ⅰ期mi RNA-126表达的相对含量为37.05±6.38,Ⅱ-Ⅲ期mi RNA-126表达的相对含量24.03±6.15,不同分期之间没有显著差异(P0.05)。2.与肾癌细胞株786-O中mi RNA-126的表达量相比,HK-2细胞株的表达量明显较高。转染786-O细胞株成功后,实验组细胞mi RNA-126的相对表达量为42.86±7.01,显著高于阴性对照组的相对表达量27.46±8.43(P0.05)。MTT法检测人肾癌细胞株转染后48小时增殖情况,实验组的细胞相对存活率为80.82±0.47,阴性对照组98.87±0.27,存在显著差异(P0.01)。Transwell侵袭试验显示,实验组细胞的数目平均为33.89±2.80,阴性对照组为53.67±2.23。与阴性对照组相比,实验组明显降低,存在显著差异(P0.05)。Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,结果显示实验组的细胞凋亡率为22.56±1.13,阴性对照组的细胞凋亡率为7.20±0.26。与阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率明显增高,存在显著差异(P0.05)。结论:1.mi RNA-126-5p在cc RCC中的表达量明显低于癌旁正常肾组织中的表达,其表达与肾透明细胞癌的肿瘤分级和临床分期无明显相关性。mi RNA-126-5p在人肾癌细胞株786-O中的表达明显低于人肾小管上皮细胞株HK-2中的表达。2.has-mi RNA-126-5p可以成功转染人肾癌细胞株786-O;转染后,mi RNA-126-5p在786-O中的表达明显上调。mi RNA-126-5p在人肾癌细胞株786-O的高表达,能够使786-O细胞增殖受到抑制,侵袭力降低,凋亡率增加。
【关键词】：肾透明细胞癌 mi RNA-126 实时定量PCR 肾癌细胞株786-O 细胞增殖 细胞侵袭力 细胞凋亡
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 英文缩略词9-10
• 前言10-12
• 1 实验材料12-15
• 1.1 PCR材料组织来源12
• 1.2 细胞来源12
• 1.3 主要试剂12-14
• 1.3.1 RT-q PCR实验试剂12-13
• 1.3.2 细胞实验主要试剂13-14
• 1.4 实验仪器14-15
• 1.4.1 组织PCR实验主要仪器14
• 1.4.2 细胞实验主要仪器14-15
• 2 实验方法15-23
• 2.1 RT-q PCR实验方法15-18
• 2.1.1 提取组织总RNA15
• 2.1.2 Total RNA浓度及纯度测定15
• 2.1.3 Poly(A)加尾反应和转录15-17
• 2.1.4 mi RNA实时定量PCR检测17
• 2.1.5 实验结果分析17-18
• 2.2 细胞实验方法18-22
• 2.2.1 冷冻细胞复苏18
• 2.2.2 细胞培养18
• 2.2.3 RT-q PCR检测细胞株中mi RNA1265p的表达18-19
• 2.2.3.1 提取细胞总RNA(含mi RNA)19
• 2.2.3.2 检测细胞株中mi RNA-126 的表达19
• 2.2.4 细胞转染19-20
• 2.2.4.1 转染步骤20
• 2.2.4.2 转染效率20
• 2.2.5 转染后肾癌细胞株 786-O中mi RNA1265p的表达测定20
• 2.2.6 MTT实验步骤20-21
• 2.2.7 细胞侵袭力实验21
• 2.2.8 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡21-22
• 2.3 统计学分析22-23
• 3 结果23-33
• 3.1 mi RNA1265p在30例标本肾癌组织与癌旁组织表达情况23-24
• 3.2 mi RNA1265p表达与肾癌组织的病理分级和临床分期的关系24-26
• 3.3 miRNA1265p在人肾癌细胞株 786-O与人正常肾小管上皮细胞株HK-2中的表达情况26-27
• 3.4 细胞转染效率27
• 3.5 mi RNA1265p在人肾癌细胞转 786-O转染后的表达情况27-28
• 3.6 MTT法检测转染后人肾癌细胞株细胞增殖的情况28-29
• 3.7 Transwell侵袭试验29-31
• 3.8 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡31-33
• 4 讨论33-37
• 5 结论37-38
• 参考文献38-40
• 综述40-49
• 参考文献46-49
• 在学期间的研究成果49-50
• 致谢50

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本文编号：1105205