MEPE蛋白影响前列腺癌细胞迁移作用机制研究

发布时间：2017-11-12 21:15

  本文关键词：MEPE蛋白影响前列腺癌细胞迁移作用机制研究

  更多相关文章： MEPE蛋白 PI3K/Rac1/PAK1 RWPE1细胞 PC3细胞

【摘要】：目的:研究细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)在前列腺癌细胞中的表达水平对前列腺癌细胞迁移能力的影响,以及MEPE蛋白影响细胞迁移能力的机制与小G蛋白家族蛋白PI3K/Rac1/PAK1通路的关系。为阐明肿瘤浸润及转移机制提供实验依据。方法:构建腺病毒包装质粒pYr-ads-4-mMEPE与pYr-ads-4-siMEPE,在HEK293细胞中包装形成腺病毒颗粒,分别转染正常前列腺上皮细胞株RWPE1与前列腺癌细胞株PC3,同时转染空质粒作为对照细胞株。免疫印迹检测转染细胞株中MEPE蛋白表达水平,确定转染效果。通过经典的划痕实验、Transwell侵袭/迁移实验对比人为上调或下调MEPE蛋白表达水平的细胞株以及其对应的空载体的细胞株之间侵袭/迁移能力的差异。进一步采用免疫印迹方法检测MEPE蛋白表达水平不同的各个细胞株内信号通路PI3K/Rac1/PAK1的信号蛋白表达水平是否也随之改变。结果:1经酶切与测序验证,pYr-ads-4-mMEPE与pYr-ads-4-siMEPE重组质粒构建成功,免疫印迹分析验证转染rAd-4-mMEPE的RWPE1细胞株中MEPE蛋白表达水平上调,转染rAd-4-siMEPE的PC3细胞株中MEPE蛋白表达水平下调,而转染相应空载体的细胞株中MEPE蛋白的表达水平与野生型细胞株一致,说明腺病毒质粒构建成功可在真核细胞表达。2通过划痕实验分别在0h与48h观察转染rAd-4-mMEPE的RWPE1细胞株、转染rAd-4-siMEPE的PC3细胞株以及其对照细胞株细胞迁移情况,MEPE蛋白表达水平高的细胞株迁移率分别为83%、56%,空载体对照细胞迁移率为68%、79%,实验结果表明MEPE蛋白表达水平高的细胞株细胞迁移能力明显增强。3 Transwell实验观察到转染rAd-4-mMEPE的RWPE1细胞株迁移率比对照细胞株增加了15%,转染rAd-4-siMEPE的PC3细胞株迁移率比对照细胞株下降了23%。实验结果表明MEPE蛋白表达水平高的细胞株细胞迁移能力明显增强。4免疫印迹分析结果显示,转染rAd-4-mMEPE的RWPE1细胞株、转染rAd-4-siMEPE的PC3细胞株以及其对照细胞株中PI3K与Rac1的信号蛋白表达水平也随MEPE表达水平改变而改变。在RWPE1细胞中其中随着MEPE蛋白表达水平增高,PI3K与Rac1表达水平也升高,在MEPE蛋白表达水平较低的转染rAd-4-siMEPE的PC3细胞株与转染空载体的RWPE1细胞株中,PI3K与Rac1表达水平较低,actin的表达水平未见明显变化,转染MEPE的RWPE1细胞中PAK1蛋白表达量没有增加,但转染PC3-si-hmepe细胞中PAK1蛋白表达量比转染空载体PC3细胞表达量明显下降。结论:1.MEPE蛋白表达水平影响前列腺癌细胞株的侵袭/迁移能力。2.MEPE蛋白参与前列腺癌细胞株迁移活动机制与PI3K/Rac1/PAK1信号通路相关。
【学位授予单位】：佳木斯大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25

【相似文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 张慧明;MEPE蛋白影响前列腺癌细胞迁移作用机制研究[D];佳木斯大学;2015年

，

本文编号：1177647