转化生长因子β1通过Smad3调控补体应答基因32转录的分子机制

发布时间：2017-12-03 07:15

  本文关键词：转化生长因子β1通过Smad3调控补体应答基因32转录的分子机制

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【摘要】：目的:前期工作发现补体应答基因32(RGC-32)是转化生长因子β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中Smad信号下游的关键调控分子。本研究拟进一步明确TGF-β诱导肾小管EMT过程中RGC-32的转录调控机制。方法:体外培养NRK-52E细胞,利用荧光素酶报告基因实验检测RGC-32启动子活性以确定Smad结合元件(SBE)是否为TGF-β诱导的RGC-32转录调控位点;通过凝胶迁移率实验(EMSA)明确与之结合的转录调控分子。结果:(1)转染野生型SBE片段的NRK-52E细胞荧光素酶活性明显增高,而转染突变的SBE片段的细胞无此表现,表明SBE是调控TGF-β诱导的RGC-32转录启动的关键位点。(2)合成32P标记的包含SBE的寡核苷酸探针行EMSA可见TGF-β诱导的核蛋白与探针复合物生成,且加入包含SBE序列的竞争片段可以抑制此核蛋白-探针复合物的形成,表明有蛋白与SBE结合并调控RGC-32的转录。(3)当加入不同的Smad抗体行超迁移实验发现Smad2和Smad3抗体可以和复合物相互作用,表明Smad2和Smad3可能是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分。(4)将Smad2和Smad3分别与p-1500RGCluc共同转染NRK-52E细胞,Smad3可以显著增加RGC-32启动子活性,表明Smad3是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分,而不是Smad2。结论:在TGF-β诱导肾小管EMT过程中,Smad3通过与RGC-32启动子区SBE结合,从而调控肾小管EMT过程。
【作者单位】： 上海交通大学附属儿童医院肾脏风湿科;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81370813) 上海市科委(114119a1700) 上海市卫生局优秀学科带头人项目(XBR2011010)
【分类号】：R692
【正文快照】： 慢性肾脏病(CKD)一直是困扰全世界的难题,并严重威胁着人类健康。而肾小管间质纤维化的程度与肾功能下降及CKD的进程密切相关[1-3]。肾小管间质纤维化的一个重要过程是上皮细胞-间充质转化(EMT)[3-5],主要表现为上皮细胞的表型和功能丢失,上皮细胞标志物如E-钙黏蛋白表达降低,

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本文编号：1247860