精子相关抗原SPAG6与TAC1和TCTE3蛋白相互作用关系的探讨

发布时间：2017-12-07 19:23

本文关键词：精子相关抗原SPAG6与TAC1和TCTE3蛋白相互作用关系的探讨

【摘要】：目的：探讨精子相关抗原SPAG6与TAC1和TCTE3之间是否存在相互作用。方法：提取健康成年雄性小鼠（18-20g）睾丸、脑、肝、肾、心、肺、脾、肌肉8种组织的总RNA，逆转录成cDNA，设计小鼠Tac1与Tcte3的特异性引物，PCR法观察Tac1及Tcte3在各组织中的表达；以小鼠睾丸组织cDNA为模版，PCR扩增Tac1和Tcte3序列，构建Tac1/pGADT7、Tac1/pEGFPN2、Tcte3/pGADT7、Tcte3/pEGFPN2的重组质粒，将含有pEGFP-N2载体的质粒转染至CHO细胞和COS-1细胞中，采用免疫荧光染色及WesternBlot检测TAC1和TCTE3在细胞中的定位和蛋白表达。将Tac1/pGADT7、Tcte3/pGADT7与SPAG6/PGBKT7进行酵母双杂交实验，提取酵母蛋白，Western Blot检测TAC1与SPAG6、TCTE3与SPAG6之间是否存在相互作用。结果：Tac1主要在睾丸、脑、心脏中表达，Tcte3在睾丸、脑、肝、肾、肺、脾、肌肉中均有表达。酶切和测序鉴定表明，，Tac1/pGADT7、Tac1/pEGFPN2、Tcte3/pGADT7、Tcte3/pEGFPN2的重组质粒构建成功。体外实验发现TAC1和TCTE3分别表达于整个胞体和胞浆，当共转染SPAG6质粒后，TAC1及TCTE3的定位均被转移至细胞微管中。酵母双杂交实验显示TACl/SPAG6和TCTE3/SPAG6组合在缺少三种氨基酸（Leu、Trp、His）的培养板上有菌落生成，Western Blot显示菌落中TAC1、TCTE3、SPAG6蛋白表达显著，分子量正确。结论：通过体外细胞实验以及酵母双杂交试验，证实精子相关抗原SPAG6与TAC1和TCTE3之间存在直接地相互作用。
【学位授予单位】：武汉科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R698.2

【参考文献】

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