重组人促红细胞生成素治疗肾间质纤维化的作用机制研究

发布时间：2018-01-10 10:01

  本文关键词：重组人促红细胞生成素治疗肾间质纤维化的作用机制研究　出处：《中国全科医学》2016年06期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的探讨重组人促红细胞生成素(r Hu EPO)治疗肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法 2014年7月—2015年6月,将人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)随机分为7组:空白对照组(E1组):未加任何刺激物;r Hu EPO对照组(E2组):r Hu EPO终浓度为20 U/ml;人纯化清蛋白诱导组(E3组):人纯化清蛋白终浓度为5 mg/ml;E4组:加人纯化清蛋白(5 mg/ml)和r Hu EPO(5 U/ml);E5组:加人纯化清蛋白(5 mg/ml)和r Hu EPO(10 U/ml);E6组:加人纯化清蛋白(5 mg/ml)和r Hu EPO(20 U/ml);Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶(ROCK)抑制剂Y27632组(E7组):加ROCK抑制剂Y27632(10μmol/L),30 min后加人纯化清蛋白(5 mg/ml)。采用细胞增殖试验检测刺激16、24、48、72 h时各组细胞增殖数,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Rho A、ROCK mRNA表达水平,细胞免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测纤维连接蛋白(FN)表达水平。结果 16 h时,各组细胞增殖数比较,差异无统计学意义(P0.05)。24、48、72 h时,各组细胞增殖数比较,差异有统计学意义(P0.05);其中E3~E6组高于E1组、E2组,E4~E6组高于E3组,E7组低于E3组,E5组、E6组高于E4组,E6组高于E5组(P0.05)。各组Rho A mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P0.05);其中E3~E6组高于E1组、E2组,E4~E6组低于E3组,E5组、E6组低于E4组,E6组低于E5组(P0.05)。各组ROCK mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P0.05);其中E3~E6组高于E1组、E2组,E4~E7组低于E3组,E5组、E6组低于E4组,E6组低于E5组(P0.05)。各组α-SMA表达水平比较,差异有统计学意义(P0.05);其中E3~E5组高于E1组、E2组,E4~E7组低于E3组,E5组、E6组低于E4组,E6组低于E5组(P0.05)。各组E-cadherin表达水平比较,差异有统计学意义(P0.05);其中E3~E6组低于E1组、E2组,E4~E7组高于E3组,E5组、E6组高于E4组,E6组高于E5组(P0.05)。各组FN表达水平比较,差异有统计学意义(P0.05);其中E3~E5组高于E1组、E2组,E4~E7组低于E3组,E5组、E6组低于E4组,E6组低于E5组(P0.05)。E3组、E4组、E5组、E6组Rho A mRNA与ROCK mRNA均呈正相关(P0.05)。结论人纯化清蛋白能诱导HK-2细胞发生上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT),进而发生RIF,而r Hu EPO通过阻断EMT的Rho A/ROCK信号转导通路从而抑制RIF发生,且在一定范围内r Hu EPO水平越高,其抑制作用越强。
[Abstract]:鐩�鐨勬帰璁ㄩ噸缁勪汉淇冪孩缁嗚優鐢熸垚绱�(r Hu EPO)娌荤枟鑲鹃棿璐ㄧ氦缁村寲(RIF)鐨勪綔鐢ㄦ満鍒，

本文编号：1404809