ErbB3在肾癌中的表达及意义

发布时间：2018-03-06 07:45

  本文选题：肾癌　切入点：ErbB3　出处：《福建医科大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一部分ErbB3在肾细胞癌及其相应的癌旁组织中的mRNA和蛋白质水平的表达的研究 目的： 1、研究ErbB3mRNA及蛋白在肾癌及其相应癌旁组织中的表达情况; 2、探讨ErbB3表达与肾癌发生、发展之间的关系。 方法： 1、分别应用普通RT-PCR和实时定量RT-PCR检测ErbB3mRNA在38例新鲜肾癌及其癌旁相应的肾组织的表达情况;用Western Blotting检测ErbB3蛋白在38例肾癌组织及其相应的癌旁肾组织中的表达情况。 2、统计分析ErbB3mRNA和蛋白在38例肾癌及相应癌旁组织中的表达情况，同时探讨25例肾癌及相应癌旁组织中ErbB3的表达与肾癌TNM分期的关系。 结果： 普通RT-PCR及实时定量RT-PCR均显示：17例肾癌组织较其相应癌旁组织ErbB3mRNA明显高表达，高表达率为44.74%（17/38），而有6例癌旁组织较癌组织ErbB3mRNA高表达，其相应高表达率为15.79%（6/38），，余15例肾癌组织及癌旁组织ErbB3mRNA表达差异不明显，占39.47%（15/38）；Western Blotting分析显示：在38例配对的肾癌及癌旁组织中，其ErbB3表达情况与普通RT-PCR及实时定量RT-PCR结果一致，其在PCR中ErbB3高表达的肾癌组织在Western Blotting检测中也同样高表达，且ErbB3在肿瘤组织中的表达明显高于癌旁组织；而25例肾癌及癌旁组织中ErbB3的表达与肾癌的TNM分期无明显相关性（P=0.379＞0.05；r=0.184）。 结论： ErbB3在肾癌组织较癌旁组织中高表达，提示ErbB3高表达可能与肾癌的发生密切相关，而与肾癌的TNM分期关系不明显。 第二部分慢病毒介导ErbB3基因过表达对A498细胞生物学特性影响的研究 目的： 观察慢病毒载体介导的ErbB3基因过表达对A498细胞生物特性的影响。 方法： 1、 HEK293T的培养使用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基；A498细胞的培养使用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，置于5%CO2、37℃的饱和湿度的温箱中培养； 2、实验分两组： pLEX-ErbB3慢病毒载体组及对照病毒载体（pLEX MCS）组；在聚乙烯亚胺（PEI）的介导下，分别与相应包装质粒psPAX2、pMD2.G共转染HEK293T细胞来包装病毒； 3、将上述两组适量病毒分别稀释入含Polybrene (终浓度8μg/mL)的常规培养基，感染A498细胞24小时后，用1ug/ml的嘌呤霉素培养基筛选24小时，普通RT-PCR及实时定量RT-PCR检测ErbB3mRNA在pLEX-ErbB3慢病毒载体组及对照病毒载体组A498细胞中的表达情况;用Western Blotting检测ErbB3蛋白在pLEX-ErbB3慢病毒载体组及对照病毒载体组A498细胞中的表达情况，并比较分析； 4、取经嘌呤霉素筛选24小时后的两组A498细胞接种于96孔板，在第3、4、5、6、7、8、9天分别以MTS法计算活细胞数量，并绘制生长曲线，比较两组细胞生长情况； 5、用MTS法检测经病毒感染后的两组A498细胞在不同顺铂浓度下的存活情况，绘制存活曲线并比较分析。 6、细胞实验重复三次，结果行t-test统计学分析。 结果： 经普通RT-PCR及实时定量RT-PCR检测发现pLEX-ErbB3慢病毒载体组细胞较对照病毒载体组细胞ErbB3mRNA明显高表达，说明PLEX-ErbB3慢病毒载体成功介导ErbB3基因在A498细胞中的高表达；Western Blotting结果也显示经pLEX-ErbB3慢病毒感染的A498细胞ErbB3蛋白同样高表达；经MTS结果显示pLEX-ErbB3慢病毒载体组细胞组较对照病毒载体组细胞明显增长更快；pLEX-ErbB3慢病毒载体组细胞组较对照病毒载体组在多种顺铂浓度下有更高的生存率。 结论： 慢病毒载体系统可有效介导外源基因ErbB3在A498细胞中表达；ErbB3的高表达能促进A498细胞的生长；ErbB3的高表达能促使A498细胞对顺铂的耐药；推测ErbB3高表达可能与肾癌耐药性有关。
[Abstract]:The study of the expression of mRNA and protein in the first part of ErbB3 in renal cell carcinoma and its corresponding para cancerous tissue
Objective:
1, to study the expression of ErbB3mRNA and protein in renal carcinoma and its adjacent tissues.
2, to explore the relationship between the expression of ErbB3 and the development of renal carcinoma.
Method锛

本文编号：1573962