IVIg与HLA-E单克隆抗体TFL007抑制HLA抗体分泌的研究

发布时间：2018-03-15 06:34

  本文选题：肾移植　切入点：IVIg　出处：《复旦大学》2014年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：静脉注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin, IVIg)是肾移植术前高敏状态患者脱敏疗法的主要药物之一,同时也应用于治疗肾移植术后抗体介导的排斥反应,但其拮抗白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)抗体的机制目前尚不清楚。加之IVIg治疗相当昂贵,常受限于血浆来源短缺而临床供应不足,且往往因不同批号而表现不同的作用效果。因此,深入研究IVIg相关机制,最终生产出可充足供应临床的、效果稳定的、价格低廉的替代品是肾移植领域亟待解决的问题。本论文从IVIg与HLA-E抗体的关系入手,从一个全新的视角对IVIg在肾移植临床应用的有效性做了合理推断,并利用体外细胞培养体系证实了HLA-E单克隆抗体较IVIg有更好的抑制HLA抗体分泌的作用。论文的第一部分验证了IVIg和HLA-E抗体之间的关系。我们发现,多种目前临床上应用的IVIg中均检测到能与HLA la (A /B/Cw)类和Ib (E/F/G)类抗原结合的物质,且HLA Ib类抗原结合的滴度水平很高,提示IVIg中含有HLA抗体。进一步我们吸附清除了IVIg中可能含有的HLA-E抗体,结果显示IVIg之前所表现出的能与多种HLA Ⅰ类抗原结合的特征也随之消失,这就表明IVIg中含有HLA-E抗体。而之前我们实验室已经发现HLA-E抗体可以与HLA la类抗原起交叉结合反应。这一发现就促使我们思考,既然HLA-E抗体可以模拟IVIg对HLA抗原的结合特征,那么它能否同样具有抑制HLA抗体分泌的能力呢?为了验证我们的假说,在论文的第二部分内容中,我们建立了诱导外周血B细胞激活后分泌HLA抗体的体系。我们抽取外周血的健康志愿者,是一位因23年前妊娠导致同种异体HLA抗原致敏的女性。在缺乏致敏HLA抗原刺激的条件下,其外周血中的特异性同种异体HLA Ⅱ类抗体在持续存在了23年之后仍表现出较高的滴度水平,这提示其外周血中有特殊的长寿记忆性B细胞的存在。我们比较了两种激活纯化B细胞的方案,根据两套方案对浆细胞比例增加的统计学差异及对HLA抗体分泌的趋势差异,在后续的干预实验中选取了有白介素4参与的激活方案。在论文的第三部分内容中,我们利用在第二部分建立的诱导体外B细胞激活分泌HLA Ⅱ类抗体的体系,比较了IVIg和HLA-E单克隆抗体TFL007对同种异体HLA抗体分泌的抑制效果。我们发现,IVIg仅能抑制原发性同种异体HLA DRB1*0101抗体的分泌,但没有对继发性同种异体HLA DRB1*0102抗体产生有统计学差异的抑制作用。更重要的是,其它4种继发性同种异体HLA抗体在经过IVIg干预处理之后,滴度水平较培养基对照组有统计学意义上的升高。而HLA-E单克隆抗体TFL007则表现出对所有分泌的HLA Ⅱ类抗体一致的抑制效果,且即使对原发性同种异体HLADRB1*0101抗体分泌的抑制强度也大于IVIg。我们随后又利用从日本北海道红十字会血液中心获得的具有HLAI类抗体分泌能力的永生化B细胞做了补充验证,该永生化B细胞来源于另一位因多次妊娠而产生HLAI类抗体的女性健康志愿者。结果显示两种不同制剂的IVIg均没有统计学证据表明具有抑制HLA I类抗体分泌的效果,而HLA-E单克隆抗体TFL007表现出了明显的抑制HLAI类抗体分泌的作用,且此抑制作用具有剂量效应关系,高浓度的TFL007表现出的抑制作用最强,随着浓度降低,抑制效果也随之减弱。本论文通过研究IVIg与HLA-E抗体的关系,从一个全新的视角对IVIg在肾移植临床应用的有效性做了合理推断,并利用体外细胞培养体系证实了HLA-E单克隆抗体较IVIg有更好的抑制HLA抗体分泌的作用。作为一种易于生产的单一成份制剂,HLA-E单克隆抗体TFL007具有替代IVIg的潜能,在临床上拮抗肾移植术前高敏状态和治疗肾移植后体液性排斥反应等方面具有广泛的应用前景。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R699.2

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本文编号：1614884