γ-synuclein作为膀胱癌分子标志物的临床意义及其生物学机制的初步探讨

发布时间：2018-03-15 21:23

本文选题：膀胱癌　切入点：γ-突触核蛋白(γ-synuclein　出处：《北京协和医学院》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究背景：膀胱癌是威胁人类健康最常见的泌尿系恶性肿瘤,大约90%以上的膀胱癌为尿路上皮癌。门诊初诊为膀胱癌的患者中约75%为非肌层浸润性膀胱癌,经典的经尿道电切手术具有较好的疗效,然而这部分患者中50～70%将会复发,并且复发肿瘤中约10～15%将会进展为肌层浸润性膀胱癌。因此,膀胱癌患者需终生严密随访。膀胱镜检查及尿脱落细胞学(VUC)仍是膀胱癌诊断和随访的金标准,但膀胱镜检查作为一项侵入性操作,给患者造成很大痛苦,不易被患者所接受；VUC敏感性较低,针对低级别肿瘤的敏感性不到40%,且易产生假阴性的结果。己获美国食品药品管理局(FDA)批准的膀胱肿瘤抗原(BTA)、核基质蛋白22(NMP-22)、纤维蛋白降解产物(FDP)等与VUC相比,具有更高的灵敏度,但因特异度较差在临床上并未能普及。因此,迫切需要寻找高敏感度及高特异度的膀胱癌肿瘤标志物用于膀胱癌的早期诊断及术后复发监测。神经突触核蛋白(synucleins)家族是一类高度保守的可溶性小分子蛋白质,主要表达于神经细胞,该家族成员包括synuclein-α(SNCA)、synuclein-β(SNCB)和synuclein-γ(SNCG),它们的氨基酸序列和结构具有很高的一致性。目前,他们的生物学功能还不十分明确。已有研究表明SNCA和SNCB主要与神经退行性疾病,如阿尔茨海默氏症和帕金森氏症相关,而SNCG则主要与肿瘤相关。近来研究发现SNCG在多种恶性肿瘤尤其是晚期肿瘤中异常高表达,它能提高肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的能力,还能干扰化疗药物所导致的的细胞凋亡等等。目前,SNCG与乳腺癌、卵巢癌、肝癌、肺癌、胃癌、食道癌、胰腺癌、膀胱癌等多种肿瘤的关系逐步得到广泛关注,使得SNCG有望成为新的肿瘤标志物和治疗的靶点。研究目的：初步探讨SNCG在膀胱癌诊断及预后监测中的临床意义及其生物学机制,为SNCG在膀胱癌中的进一步研究及临床应用奠定基础。研究方法：1、回顾性收集具有完整临床及随访资料的膀胱癌手术标本301例、癌旁组织98例,免疫组化检测其中SNCG蛋白表达情况,并分析SNCG表达与膀胱癌临床病理特征及预后的关系；2、ELISA法检测58例膀胱癌患者血清及尿液SNCG蛋白浓度,比较其表达差异；3、Western blot检测17例膀胱癌患者尿液SNCG浓度,同时检测对应癌组织中SNCG短链、SNCG长链浓度及对照组β肌动蛋白的浓度；4、收集95例新诊断膀胱癌病人术前及术后尿液(出院前、术后1个月、3个月和6个月,终点：肿瘤复发),ELISA法检测其SNCG浓度,动态观察尿液SNCG浓度变化,并分析其与膀胱癌临床病理特征之间的关系；5、RT-PCR、Western blot检测膀胱癌细胞系EJ、T24、5637和UMUC-3中SNCG的表达,筛选SNCG表达最高的细胞株备用；6、设计并合成siRNA序列,转染膀胱癌细胞系5637并筛选出有效序列；7、CCK-8细胞增殖实验检测SNCG表达抑制后对膀胱癌细胞系5637增殖能力的影响；8、Transwell小室模型实验检测SNCG表达抑制后对膀胱癌细胞系5637侵袭能力的影响。结果：1、SNCG在膀胱癌组织中呈高表达,且与膀胱癌复发相关；Kaplan-Meier生存曲线示,SNCG阴性表达组的无病生存期(Disease Free Survival,DFS)和总生存期(Overall Surivival,OS)明显高于SNCG阳性表达组(分别为P=0.010,P=0.022),SNCG阴性组术后DFS和OS分别为(95.7±4.3)个月(95% CI,87.3～104.1个月)、(94.8±4.0)个月(95% CI,87.0～102.6个月),而SNCG阳性组术后DFS和OS分别为(71.5±4.9)个月(95% CI,61.9～81.0个月)、(85.9±5.5)个月(95%CI,75.1～96.6个月)；COX多因素显示SNCG是膀胱癌预后的独立预测因子(P=0.000)；2、尿液中SNCG蛋白水平明显高于血清SNCG蛋白水平,且尿液SNCG水平与对应癌组织SNCG水平高度一致；3、病人术前尿液SNCG浓度与肿瘤浸润深度密切相关,同一病人术后尿液SNCG浓度较术前明显下降,复发时尿液SNCG浓度再度上升；4、SNCG在膀胱癌细胞系5637中表达明显高于EJ、T24、和UMUC-3;5、成功筛选SNCG表达被抑制的膀胱癌细胞系5637稳定细胞株siSNCG-244;6、CCK-8细胞增殖实验显示：抑制SNCG表达能降低5637细胞的增殖能力；7、Transwell小室实验提示：抑制SNCG表达,膀胱癌细胞系5637迁移、侵袭能力减弱。结论：1、SNCG在膀胱癌组织中呈高表达,且可作为膀胱癌预后的独立预测因子,提示SNCG可能与膀胱癌的发生、发展有关；2、尿液中SNCG蛋白水平明显高于血清SNCG蛋白水平,且与对应癌组织中SNCG水平一致,提示膀胱癌细胞可以直接分泌到肿瘤周围的尿液中,尿液SNCG有可能是膀胱癌检测的理想标志物；3、同一病人术后尿液SNCG浓度较术前明显下降,复发时尿液SNCG浓度再度上升,提示尿液SNCG可作为膀胱癌复发的标志物；4、抑制SNCG表达能改变膀胱癌5637细胞恶性表型,包括：抑制细胞的增殖能力和抑制细胞的迁移、侵袭能力；siRNA介导的SNCG基因表达下调能抑制其恶性表型,提示SNCG有望成为膀胱癌基因治疗的靶点。
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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14

【参考文献】