内脏脂肪素在糖尿病肾病发病机制中的作用初探

发布时间：2018-03-15 22:05

本文选题：糖尿病肾病　切入点：db/db小鼠　出处：《北京协和医学院》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究背景：糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD),是糖尿病最严重的并发症之一,随着糖尿病发病率不断升高,DKD越来越成为终末期肾病的一个重要病因。目前认为DKD是多因素疾病,受代谢、炎症、内皮功能等多方面影响。内脏脂肪素(visfatin, VF)是近些年新发现的一种脂肪细胞因子,又称前B细胞集落增强因子(pre-B-cell colony enhancing factor, PBEF)和尼克酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribos yltransferase, Nampt)。VF的生物学功能复杂,与脂质和能量代谢、炎症反应密切相关。目前研究已表明,在2型糖尿病、代谢综合征及多种急慢性炎性疾病患者中,血浆VF水平增加,提示VF可能在DKD发病机制中具有重要作用,对VF生理功能的深入研究可能为DKD的治疗提供新方向。研究目的：观察DKD动物模型db/db小鼠的代谢状况,评价肾脏损害及VF等脂肪因子在db/db小鼠肾脏的表达,通过抑制炎症反应来了解倍半萜内酯(parthenolide, PTN)是否可以影响VF的表达,以探讨VF与DKD的关系及其在DKD发病机制中的可能作用。研究方法：选用瘦素受体缺陷的2型糖尿病db/db小鼠及其杂合子db/m小鼠,在8周龄时获取基础数据,包括测量体重,留取血尿及肾组织,同时将小鼠分为对照组db/m组,实验组db/db组,以及干预组db/db+PTN组。在小鼠8周龄、12周龄、16周龄、20周龄时分批处死,留取血、24小时尿、肾组织。测定血中代谢指标,包括血糖、血脂、胰岛素、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance, HOMA-IR);脂肪因子VF、抵抗素、视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4, RBP4);肾脏损害指标,包括血肌酐、尿白蛋白、尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-glucosaminidase, NAG)、尿钠排泄分数等；通过免疫组织化学染色方法观察肾组织VF,免疫印迹观察肾组织VF、抵抗素的表达情况。实验结果：1、与同周龄db/m+NS组小鼠比较,DKD动物模型db/db小鼠的体重、血糖、血总胆固醇(total cholesterol, TC)、HOMA-IR、血抵抗素在各个时间点(8、12、16、20周龄)显著高于对照(p0.05)；血甘油三酯(triglyceride,TG)在8周龄尤其明显(p0.05)；血胰岛素在8、12、16周龄显著高于对照(p0.05)；血VF在各个时间点均高于对照,并在8周龄和12周龄有统计学差异(p0.05)；血RBP4在16、20周龄高于对照,并在20周龄有统计学差异(p0.05)。经PTN干预后,与同周龄db/db+NS小鼠比较,db/db+PTN组小鼠的体重、血糖、TG、血VF无明显变化；TC在12周龄明显下降(p0.05)；血胰岛素水平在12、16、20周龄有下降趋势；HOMA-IR在12、16周龄有下降趋势,并在16周龄有统计学差异(p0.05)；血抵抗素水平在各个时间点(8、12、16、20周龄)有下降趋势；血RBP4在16、20周龄较有下降的趋势,并在20周龄有统计学差异(p0.05)。2、与同周龄db/m+NS组小鼠比较,db/db小鼠的尿量在各个时间点(8、12、16、20周龄)有增加的趋势；尿白蛋白浓度及24小时尿白蛋白水平在各个时间点(8、12、16、20周龄)均有不同程度的增加,并在8、16、20周龄有统计学差异(p0.05)；血肌酐无明显变化；尿NAG、尿钠排泄分数在16、20周龄有增加的趋势。经PTN干预后,与同周龄db/db+NS小鼠比较,db/db+PTN组小鼠的尿量、血肌酐、NAG无明显变化；尿白蛋白浓度及24小时尿白蛋白水平在12周龄有下降趋势；尿钠排泄分数在16、20周龄有下降趋势。3、VF在各组小鼠的肾小球及小管间质中均有分布,主要分布在近端小管上皮细胞的胞浆内,其表达不随周龄增长而改变。db/db组小鼠与同周龄db/m组小鼠相比肾脏VF表达增加(免疫组化阳性染色面积率：8w:2.216±1.036 vs 8.968±5.493 vs, p0.05；12w:4.138±3.001 vs 8.333±3.097；16w:2.122±1.106 vs 6.377± 2.459,p0.05；20w 2.419±2.871 vs 4.502±1.386.免疫印迹相对光密度值：8w:1.000±0.150 vs 1.221±0.045,p0.05；12w:1.107±0.126 vs 1.239± 0.066:16w:0.973±0.072 vs 1.157±0.06l,p0.05；20w:1.097±0.185 vs 1.157 ±0.339).经PTN干预后,db/db+PTN组小鼠肾脏VF表达与同周龄db/db+NS组小鼠相比无明显变化(免疫组化阳性染色面积率：8w:8.968±5.493 vs 8.765±4.983: 12w:8.333±3.097 vs 8.279±4.100:16w:6.377±2.459 vs 6.923±2.176；20w 4.502±1.386 vs 4.071±1.261.免疫印迹相对光密度值：8w:1.221±0.045 vs 1.240±0.085；12w:1.239±0.066 vs 1.398±0.308；16w:1.157±0.061 vs 1.164 ±0.188；20w:1.157±0.339 vs 1.166±0.254).4、抵抗素在各组小鼠肾脏中均有表达,其表达随周龄增长而增加,16周龄db/db组小鼠与同周龄db/m组小鼠相比肾脏抵抗素表达增加(免疫印迹相对光密度值：8w:1.000±0.053 vs 0.991±0.032；16w:1.168±0.049 vs 1.072±0.058,p 0.05),经PTN干预后,db/db+PTN组小鼠肾脏抵抗素水平在16周龄与同周龄的db/db+NS组小鼠相比减少(免疫印迹相对光密度值：8w:0.991±0.032 vs 1.025 ±0.114；16w:1.168±0.049 vs 1.072±0.058, p0.05)。实验结论：1.db/db小鼠表现出明显的肥胖、血糖升高、血脂升高、胰岛素抵抗等糖尿病表现,该模型同时伴有肾脏损害特征,PTN可能对血脂升高和胰岛素抵抗有一定改善作用。2.db/db小鼠的血VF、抵抗素、RBP4等脂肪因子水平较对照组有不同程度的增加,PTN可能对升高的抵抗素和RBP4有一定改善作用。3,VF在小鼠肾脏中有表达,db/db/、鼠在不同时间点肾组织VF蛋白表达水平较对照组相比有不同程度的增加,PTN干预后肾组织VF蛋白表达水平无明显下降。4,抵抗素在小鼠肾脏中有表达,其蛋白表达水平在db/db小鼠肾组织中增加,PTN干预后肾组织抵抗素蛋白表达水平下降。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R692.9

【参考文献】