高压氧对大鼠肾移植后缺血再灌注肾组织IDO基因表达影响的实验研究

发布时间：2018-03-19 16:44

  本文选题：高压氧　切入点：缺血再灌注损伤　出处：《遵义医学院》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：通过构建同系大鼠肾移植缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury，IRI)模型，观察吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine2,3-dioxygenase，IDO）基因和白细胞介素-8(interleukin-8，IL-8)在移植肾组织和血中的表达变化以及高压氧(hyperbaric oxygenation，HBO)治疗对其表达的影响，，进一步探讨肾IRI的发生机制以及HBO对肾IRI的治疗机制。 方法：SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、肾移植组以及肾移植+HBO治疗组(HBO治疗组)，每组又分为1h、3h和5h组。肾移植组单纯行肾移植手术，HBO治疗组将肾移植后的大鼠分别于再灌注后0h、2h和4h置于动物实验氧舱内行HBO治疗1h，假手术组仅切除右肾，不做肾移植手术。肾移植后1h、3h和5h时，肾移植组和HBO治疗组取移植肾组织和血标本，假手术组则于相应时点取左肾组织和血标本。采用HE染色观察肾组织的病理改变，采用免疫组织化学法、激光共聚焦扫描荧光显微镜(laser scanning confocalfluorescence microscope，LCFM)以及实时荧光定量PCR(real time PCR)检测IDOmRNA和蛋白的表达，采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测血中IL-8的含量，采用全自动生化分析仪检测血清肌酐(serum creatinine，SCr)含量。 结果： 1.肾组织病理变化：假手术组肾组织结构正常。肾移植组在1h时，可见肾间质血管轻度扩张充血，肾小球伴轻度增大，系膜细胞轻度增生，肾小管上皮细胞轻度肿胀并管腔轻度扩张；在3h时，可见肾小管上皮细胞肿胀，呈颗粒样变性；在5h时，可见肾小球体积增大，伴少量中性粒细胞浸润，肾小管管腔扩张，可见蛋白管型和红细胞管型，上皮细胞明显肿胀，呈颗粒样变性。HBO治疗组：在1h和3h时，镜下改变与肾移植组相应时间点无显著差别；在5h时仍见肾小球体积增大，但仅有极少量中性粒细胞浸润，肾小管上皮细胞肿胀和小管扩张减轻，蛋白和红细胞管型减少。 2.肾功能改变：在1h、3h和5h各时间点，与假手术组比较，肾移植组和HBO治疗组SCr值均显著增高（P0.05）；与肾移植组比较，HBO治疗组SCr值在1h、3h时无明显差异（P0.05），但在5h时SCr值则明显降低（P0.05）。在同一组内，假手术组在1h、3h、5h组SCr值无明显差异（P0.05），肾移植组在1h、3h、5h组SCr值随时间延长，逐步显著增高（P0.05）；HBO治疗组3h和5h组与1h组比较SCr值显著增高（P0.05），3h组和5h组之间SCr值则无明显差异（P0.05）。 3.血清中炎症因子IL-8的变化：在1h、3h及5h各时间点与假手术组比较，肾移植组IL-8水平显著增高(P0.05)；HBO治疗组在1h、3h时IL-8水平仍显著高于假手术组(P0.05)，但在5h时IL-8水平则无明显差异(P0.05)；HBO治疗组与肾移植组比较，在1h时IL-8水平无明显差异，而在3h、5h时IL-8水平则显著低于单纯肾移植组(P0.05)。 4.肾组织IDO基因的表达变化 (1)免疫组织化学法检测肾组织IDO表达：结果显示IDO主要表达于肾小管，肾小球无表达，并对各组IDO表达进行相对定量分析(积分光密度)。在1h时三组IDO表达的积分光密度值无显著差异；在3h时肾移植组IDO积分光密度值与假手术组也无显著差异，在5h时则明显增高(P0.05)；HBO治疗组IDO积分光密度值在3h、5h时明显低于肾移植组(P0.05)。 (2)激光共聚焦扫描荧光显微镜检测肾组织IDO表达：发现绿色荧光蛋白(green fluorescentprotein，GFP)-IDO光点主要分布于肾小管上皮细胞。 (3)肾组织IDOmRNA的表达变化：在1h时间点，三组IDOmRNA表达水平无显著差异；与假手术组相比，肾移植组IDOmRNA表达水平在3h时无显著差异，而在5h时则明显增高(P0.05)；HBO治疗组IDOmRNA表达水平在3h、5h时明显低于肾移植组(P0.05)，但与假手术组无显著差异。 结论： 1.肾移植再灌注后早期便出现了明显的炎症反应，炎症因子IL-8的大量产生可加重肾缺血再灌注损伤。 2.肾移植后随着再灌注时间的延长，肾组织IDO的过表达可能是肾脏缺血再灌注损伤加重的重要机制之一。 3.高压氧治疗在移植肾缺血再灌注后明显抑制了肾组织IDO的表达及炎症因子的产生，保护了肾功能。对肾组织IDO基因表达的抑制作用是高压氧防治肾缺血再灌注损伤的又一重要分子机制。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R699.2

【参考文献】

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本文编号：1635127