益气养阴法对IgA肾病大鼠血管紧张素Ⅱ和血管紧张素转换酶的影响

发布时间：2018-03-29 00:37

  本文选题：IgA肾病　切入点：益气养阴　出处：《河北医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的:本实验通过建立IgA肾病大鼠模型，应用益气养阴中药对大鼠模型进行干预治疗，检测实验大鼠的尿红细胞计数、24小时尿蛋白定量、肾脏病理学变化，免疫组织化学法及RT-PCR法检测血管紧张素转换酶（ACE）在大鼠肾脏组织中的表达，放射免疫法测定大鼠血清中血管紧张素II（AngII）的水平，以探究益气养阴中药对IgA肾病的治疗作用及可能的作用机制，为临床应用提供实验基础以及理论依据。 方法:选取40只体重在150-200g左右的SPF级雄性SD大鼠，适应性饲养1周过后，随机分为正常组、模型组、益气养阴组及贝那普利组。除正常组外，模型组、贝那普利组、益气养阴组，均运用以下方法复制大鼠IgAN模型，具体如下：将免疫原BSA(美国Sigma公司)配制成100g/L浓度，隔天灌胃，剂量为400mg/kg，持续8周；每周一次皮下注射四氯化碳0.1ml、蓖麻油0.3ml,连续9周；并于第六周尾静脉注射脂多糖(美国Sigma公司)0.05mg。正常组分别予以等量的纯净水隔天灌胃，持续8周；每周一次皮下注射生理盐水0.4ml连续9周；并于第六周尾静脉注射等量生理盐水。第10周起，贝那普利组、益气养阴组分别予以盐酸贝那普利片、相应中药灌胃，正常组、模型组予以等量纯净水灌胃，持续8周。分别于3周末、6周末、9周末、13周末、17周末用代谢笼收集各个组大鼠的尿液，以测定24h尿蛋白定量及尿红细胞计数，实验末即第17周末，断头处死实验动物，，股动脉取血，血清离心后测定肾功能，迅速采集大鼠肾脏标本。光镜观察大鼠肾脏组织病理学改变。RT-PCR及免疫组化法测定ACE在肾脏组织的表达情况，放射免疫法测定血清中AngII水平。 结果： 1益气养阴方药对IgA肾病大鼠24h尿蛋白定量的影响 正常组的大鼠在第3周末、第6周末、第9周末、第13周末、第17周末测得的尿蛋白比较，均没有明显差异(P0.05)。 造模开始后，模型组与各治疗组的大鼠于造模的第6周末开始出现蛋白尿，并且尿蛋白呈进行性增长，于第9周末达到最高，其与正常组相比较,差异有统计学意义(P0.05)。 给药后，各治疗组大鼠于4周后尿蛋白开始下降，与模型组相比24h尿蛋白定量明显减少(P0.05)；益气养阴组和贝那普利组间比较，无显著差异(P0.05)。 2益气养阴方药对IgA肾病大鼠尿红细胞计数的影响 正常组的大鼠在整个实验中，均未出现血尿。 造模开始后，模型组与治疗组大鼠于第6周末开始出现血尿,其尿红细胞计数与对照组相比显著增多(P0.05),并且呈进行性增多,于第9周末达到高峰，与正常组相比,其差异有统计学意义(P0.05)。 给药后，益气养阴组大鼠尿红细胞计数在治疗4周后开始下降，其与模型组相比明显降低(P0.05)；贝那普利组大鼠尿红细胞计数与模型组相比有所下降，但二者之间无显著差异(P0.05)。 3对IgA肾病大鼠Scr、BUN的影响 正常组、模型组、益气养阴组、贝那普利组，血清Scr、BUN比较：各组之间差异均无统计学意义(P0.05)。 4肾脏病理学的改变 光镜下，正常组大鼠的肾小球结构完整，肾小球基质、系膜未见明显的异常改变；模型组大鼠可以见到肾小球系膜细胞增生和系膜基质增多；益气养阴组与贝那普利组也都有不同程度的病理改变，但和模型组相比较病变较轻。 免疫荧光示：正常组大鼠肾小球系膜区未见或少见IgA沉积，模型组大鼠可以见到IgA沿肾小球系膜呈团块状分布，益气养阴组和贝那普利组也可见到有不同程度IgA的沉积，但与模型组相比较轻。 5RT-PCR和免疫组化对肾脏组织中ACE表达的影响 RT-PCR结果示：和正常组相比，模型组、益气养阴组与贝那普利组大鼠ACE在肾脏组织的表达明显升高(P0.05)；与模型组比较，益气养阴组与贝那普利大鼠ACE在肾脏组织的阳性表达明显减弱(P0.05)；但益气养阴组与贝那普利组间无明显差异(P0.05)。 免疫组化染色示：和正常组相比，模型组、益气养阴组与贝那普利组大鼠ACE在肾脏组织的阳性表达增强(P0.05)；与模型组比较，益气养阴组与贝那普利组大鼠ACE在肾脏组织的阳性表达减弱(P0.05);但益气养阴组与贝那普利组间无明显差异(P0.05)。 6放射免疫法测定血清AngII水平 与正常组相比较，模型组、益气养阴组与贝那普利组大鼠血清中AngII水平升高(P0.05)；与模型组比较，益气养阴组与贝那普利组大鼠血清中AngII水平降低(P0.05)；但益气养阴组与贝那普利组间无明显差异(P0.05)。 结论： 1益气养阴方药可以明显减少IgA肾病大鼠的尿蛋白及尿红细胞计数。 2益气养阴方药可以有效减轻IgA肾病大鼠肾脏组织的病理损害。 3益气养阴方药可以抑制ACE在肾脏组织的表达及降低血清中AngII的水平，提示其可能通过抑制RAS系统的激活而起到延缓肾脏病的发展。
[Abstract]:Objective: this experiment established IgA nephropathy rat model, application of Tonifying Qi and nourishing Yin treated rats, urine red blood cell count assay in rats, 24 hour urinary protein, renal pathological changes, immunohistochemical method and RT-PCR method to detect angiotensin converting enzyme (Zhang Su ACE) expression in kidney tissues of rats were measured by radioimmunoassay, blood vessels in rat serum angiotensin II (AngII) level, to explore the therapeutic effects of traditional Chinese medicine of Supplementing Qi and nourishing Yin on IgA nephropathy and its possible mechanism, to provide experimental basis and theoretical basis for clinical application.
Methods: a total of 40 weight around 150-200g SD male SPF rats, fed after 1 weeks, were randomly divided into normal group, model group, Yiqi Yangyin group and Benner Pury group. Except the normal group, model group, Benner Pury group, supplementing qi and nourishing Yin group, are using the following method to copy IgAN rat model. The details are as follows: the immunogenicity of BSA (American Sigma company) prepared by the concentration of 100g/L, the next day orally, at a dose of 400mg/kg for 8 weeks; weekly subcutaneous injection of carbon tetrachloride 0.1ml, castor oil, 0.3ml, for 9 weeks; and in the sixth weeks of intravenous injection of lipopolysaccharide (Sigma) in normal 0.05mg. group were given the same amount the pure water the next day orally, for 8 weeks; weekly subcutaneous injection of 0.4ml saline for 9 weeks; and in the sixth weeks of intravenous injection of normal saline. The tenth week, Benner Pury group, supplementing qi and nourishing Yin group were given Benap hydrochloride Li, the corresponding Chinese medicine gavage, the normal group, model group were given the same amount of pure water by gavage for 8 weeks, respectively. At the end of the 3 week, 6 week, 9 week, 13 week, 17 weeks using metabolic cages to collect each group of rats was determined by urine, 24h urine protein and urine red blood cell count, experiment that is the end of the seventeenth week, decapitated animal experiment, femoral artery blood, determination of renal function serum after centrifugation, collected samples of rat kidney. To observe the expression changes.RT-PCR and immunohistochemical determination of ACE in renal tissue of rat kidney tissue pathology by light microscopy, determination of serum AngII levels by radioimmunoassay.
Result锛

本文编号：1678809