RNA干扰Livin基因的表达对膀胱癌细胞凋亡及细胞周期的影响研究

发布时间：2018-03-29 12:09

  本文选题：Livin　切入点：膀胱癌　出处：《中南大学》2014年博士论文

【摘要】：凋亡抑制蛋白(Inhibitor of Apoptosis Protein, IAPs)是生物体内一类包含高度保守的BIR结构域的内源性抗细胞凋亡因子。Livin是近年来IAPs家族最新发现的成员,其分子结构包含1个BIR结构域和1个RING指结构域。Livin在正常成人组织中基本不表达,在许多肿瘤中高表达,被认为是肿瘤预后不良及药物抵抗的重要影响因素。研究表明Livin不但具有抗细胞凋亡作用,其分子结构包含的RING指结构域还赋予其泛素结合酶样活性,在细胞周期的调节上也有重要作用。国内关于Livin在膀胱癌中的表达情况,对其预后和化疗药物抗性的研究目前仍然较少。Livin的表达对于膀胱癌细胞凋亡及细胞周期的影响有待进一步研究。 目的： (1)设计针对Livin的高效特异性siRNA并进行筛选,作为进一步实验研究的工具。(2)通过对人膀胱癌T24细胞系中Livin基因表达的RNA干扰,抑制Livin基因的表达,观察Livin基因表达下降对于膀胱癌细胞凋亡及细胞周期的影响。 方法： (1)通过siRNA设计软件及siRNA数据库等工具设计出Livin基因特异性的siRNA。通过RT-PCR和Western blot等方法观察其抑制Livin基因在人膀胱癌T24细胞系中表达的效率,筛选出具有高效性特异性的siRNA。(2)质粒转染高特异性siRNA干扰Livin基因的表达,通过双变量流式细胞仪计数,检测Livin基因表达下降对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响。(3)质粒转染高特异性siRNA干扰Livin基因的表达,用过流式细胞仪计数,检测抑制Livin基因表达下降对人膀胱癌T24细胞的细胞周期的影响。 结果： 1. Livin特异性siRNA的筛选 使用siRNA设计软件和siRNA数据库获得3种siRNA,通过RT-PCR和Western blot对每种siRNA在T24细胞中干扰效率进行检验,结果表明3种siRNA均能较显著的抑制Livin基因在T24细胞中的表达,其中1种能够显著的降低Livin基因的表达。 2. Livin基因表达下调对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响 双变量流式细胞计数显示,Livin基因表达下降,导致T24细胞自发性凋亡出现明显增高。 3. Livin基因表达下调对人膀胱癌T24细胞周期的影响 流式细胞计数显示Livin基因表达下降,导致T24细胞周期明显停滞于G2/M期。 结论： 1. Livin基因在T24细胞中的表达抑制,可以提高T24细胞自发性凋亡的发生率。 2. Livin基因在T24细胞中的表达抑制,可以有效的抑制肿瘤细胞的增殖,减缓肿瘤的发展。
[Abstract]:Inhibitor of apoptosis protein (Inhibitor of Apoptosis Protein, IAPs) is an endogenous organism contains a highly conserved BIR domain anti apoptotic factor.Livin is a member of the IAPs family in recent years, the newly discovered, its molecular structure contains 1 BIR domains and 1 RING domains of.Livin in normal adult tissue no expression, is highly expressed in many tumors, were considered to be important factors affecting prognosis and adverse drug resistance. The results show that Livin not only has anti apoptosis effect and its molecular structure contains the RING finger domain also gives the ubiquitin conjugating enzyme like activity, also has an important role in the regulation of cell cycle. The expression of Livin in bladder cancer, study on the prognosis and chemotherapy drug resistance is still less influence on the expression of.Livin in cell cycle and apoptosis of bladder cancer cells have to be Further study.
Objective:
(1) design for Livin, and specific siRNA were selected as further research tools. (2) by RNA interference on the expression of Livin in human bladder cancer cell line T24 gene, inhibit the expression of Livin gene, Livin gene expression decreased for observation and cell cycle of bladder cancer cell apoptosis.
Method锛，

本文编号：1681063