睾丸孤核受体4在CD133阳性前列腺癌细胞侵袭转移中的作用及机制研究
发布时间:2018-03-31 09:07
本文选题:转移性前列腺癌 切入点:前列腺癌干细胞 出处:《苏州大学》2016年博士论文
【摘要】:研究背景和目的:雄激素阻断是晚期前列腺癌首选的治疗方式,但随着治疗时间的延长,原来效果很好的雄激素阻断治疗变为无效,肿瘤重新开始进展,最终发展为去势抵抗性前列腺癌,造成肿瘤复发转移。干细胞学说认为随着雄激素阻断治疗的进行,肿瘤干细胞群体数量增加,从而导致前列腺癌的去势抵抗和转移。睾丸孤核受体4(TR4)在干/祖细胞分化过程中起到重要作用,前期研究TR4通过多种途径促进前列腺癌的进展,包括促进CD133阳性前列腺癌干/祖细胞的化疗耐药。但TR4对CD133阳性前列腺癌干/祖细胞转移的影响尚未有报道。本研究目的在于探讨TR4在CD133阳性前列腺癌细胞侵袭转移中的作用及相关机制,为转移性前列腺癌的治疗提供新的思路。研究方法:1、免疫磁珠法在去势抵抗性前列腺癌C4-2及CWR22Rv1细胞株中分离出CD133阳性细胞,检测其干细胞标志物及TR4表达水平。2、慢病毒技术在上述分离出的CD133阳性前列腺癌干/祖细胞中沉默TR4,Transwell侵袭实验和3D侵袭实验观察TR4对CD133阳性前列腺癌细胞侵袭能力的影响。3、收集30个前列腺癌转移相关基因,在CD133阳性前列腺癌干/祖细胞中沉默TR4后,QPCR检测筛选变化最明显的基因。4、沉默TR4,Western blot检测EZH2及下游转移相关基因蛋白表达变化。5、预测TR4蛋白与EZH2启动子可能的结合位点。染色质免疫共沉淀检测TR4与预测结合位点的结合情况。荧光素酶报告基因检测TR4对EZH2启动子活性的调控。6、沉默TR4的同时过表达EZH2,观察侵袭表型变化,正反验证TR4是否确实通过EZH2促进前列腺癌干/祖细胞介导的前列腺癌侵袭转移。7、构建裸鼠移植瘤模型:分对照组及TR4沉默组对裸鼠进行前列腺原位注射,使CWR22Rv1来源的CD133阳性前列腺癌细胞成瘤,观察肿瘤转移情况,免疫组化检测TR4及EZH2表达情况,进一步验证靶向TR4对前列腺癌干/祖细胞介导的前列腺癌转移的抑制作用。研究结果:1、免疫磁珠法分离出的CD133阳性前列腺癌干/祖细胞具有明显高于亲本细胞的干细胞标志物CD133和Nanog。TR4 m RNA和蛋白在分离出的干/祖细胞中均高表达。2、Transwell侵袭实验和3D侵袭实验结果显示沉默TR4导致CD133阳性的前列腺癌细胞侵袭能力明显下降。3、在C4-2和CWR22Rv1细胞分离出的CD133阳性前列腺癌细胞中沉默TR4后,有5个共同的基因m RNA表达变化最为明显,分别是KAI1和TIMP2升高,IGF、HIF2α和EZH2下降。4、在C4-2和CWR22Rv1细胞分离出的CD133阳性前列腺癌细胞及前列腺癌干细胞系PCSC中沉默TR4后,EZH2及其下游转移相关基因NOTCH1、SLUG、TGFβ1和MMP9的蛋白表达均显著下降。5、生物信息学分析发现EZH2的启动子区3个可能的TR4反应元件。染色质免疫共沉淀实验发现TR4蛋白结合到前两个TR4反应元件。荧光素酶报告基因实验证实TR4蛋白通过与第一个TR4反应元件作用调控EZH2表达。6、沉默TR4的同时过表达EZH2,可部分逆转沉默TR4引起的EZH2下游转移相关基因的下调及侵袭能力的下降。7、裸鼠前列腺原位注射成瘤实验结果显示,对照组肿瘤转移比例高于TR4沉默组。免疫组化染色结果显示TR4沉默组标本EZH2蛋白的表达水平低于对照组。研究结论:1、TR4在前列腺癌干/祖细胞高表达。2、前列腺癌干/祖细胞中高表达的TR4促进前列腺癌侵袭转移。3、TR4通过结合于EZH2启动子TR4反应元件,在转录水平转录调控EZH2表达。4、TR4通过促进EZH2及其下游转移相关基因NOTCH1、SLUG、TGFβ1和MMP9表达,从而促进前列腺癌干/祖细胞介导的前列腺癌侵袭转移。
[Abstract]:The effect of TR4 on the invasion and metastasis of CD133 - positive prostate cancer cells was studied . The expression level of TR4 protein was significantly lower than that in control group . The results showed that TR4 had higher expression level of EZH2 than that in control group .
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R737.25
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 Wanqing Chen;Rongshou Zheng;Hongmei Zeng;Siwei Zhang;;The updated incidences and mortalities of major cancers in China, 2011[J];Chinese Journal of Cancer;2015年11期
,本文编号:1690062
本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mjlw/1690062.html
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