LncRNA-HEIRCC通过调控上皮间质转化进程促进肾癌进展的相关机制研究

发布时间：2018-04-03 02:41

本文选题：肾透明细胞癌　切入点：长链非编码RNA　出处：《重庆医科大学》2017年博士论文

【摘要】：背景与目的:肾细胞癌简称肾癌,为我国泌尿生殖系统最为常见的癌症之一,占成人恶性肿瘤的3%左右,是严重威胁人民健康安全的重要疾病。由于起病隐匿,约20%~30%的患者初次就诊时就已存在远处转移,然而该疾病对化疗和放射治疗不敏感,因此该类患者预后往往很差。上皮间质转化(EMT)是指具有上皮表型的细胞在多种因素的刺激下,上皮组织基本结构消失,转化为间质表型细胞的过程。上述的这些变化可以降低癌症细胞间的相互黏附力,并促进其迁移运动能力,最终让癌症细胞更加倾向于向远处侵袭转移。研究表明长链非编码RNA可通过类似抑癌基因和癌基因的作用参与多种癌症的临床发生及进展。目前已经陆续发现多种LncRNA可以调控EMT的进程,因此探究肾癌EMT的潜在分子机制,可能为抑制肾癌进展以及改善肾癌患者临床预后具有重要意义。本研究运用LncRNA芯片筛选典型肾脏透明细胞癌及癌旁正常肾组织标本中差异表达的lncRNAs;通过生物信息学等方法挑选部分候选IncRNA,包括HEIRCC;然后进一步在扩大的临床样本及肾癌细胞系中进行验证,并分析其与临床病理学特点间的相关性;最后,运用rna干扰技术敲低肾癌细胞株内heircc的表达,然后研究转染前后肾癌细胞生物学功能及emt相关分子标记物的变化。方法:(1)我们使用长链非编码rna芯片技术获取肾癌及癌旁组织的incrnas表达谱;(2)运用生物信息学等方法挑选相关的候选incrnas;(3)在扩大的60例肾癌组织与癌旁正常肾脏组织样本中进行实时荧光定量pcr的验证,并分析候选incrna-heircc与肾癌患者临床病理学特征间的关系。(4)采用rna干扰的方法减少肾癌细胞株内heircc的表达,然后通过cck8细胞增殖实验、细胞凋亡实验、细胞划痕及transwell等实验评估其对肾癌细胞生物学的影响。(5)再此基础上运用western-blot方法检测转染前后肾癌细胞内e-cadherin、n-cadherin、vimentin、zeb-1、slug、snail的蛋白表达变化。结果:在肾癌组织中差异表达的incrna共2840个其中共有1151个lncrna上调,1689个lncrna下调(差异倍数大于2,且p0.05);综合筛选条件,选择tcons_00006756作为后续研究对象,并命名为heircc。qrt-pcr验证了其在扩大临床样本及肾癌细胞株中的高表达。在60对肾癌标本中发现高表达的heircc与肾癌患者的肿瘤分化程度(p=0.037)、tnm分期(p=0.047)、淋巴结转移(p=0.036)及远处转移(p=0.039)有关,而与患者年龄及性别无关(p0.05)。经过rna干扰后,随着heircc表达的降低,肾癌细胞a498、achn的增殖、迁移及侵袭能力显著下降,而细胞的凋亡率显著增加。同时,相对阴性对照组,实验组中n-cadherin、vimentin蛋白均降低,e-cadherin的蛋白表达升高,且差异均有统计学意义(p0.05);Slug、Snail的蛋白表达无显著变化,ZEB-1蛋白显著下降(p0.05)。结论:肾癌中存在大量显著差异表达的长链非编码RNA,说明Lnc RNA与肾癌存在着关联;HEIRCC在肾癌组织及肾癌细胞株中呈高表达,且与肿瘤的分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移有关;明确了HEIRCC在肾癌中起到促进细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞凋亡的作用;揭示了其通过影响ZEB-1蛋白的表达调控EMT的进程从而导致肾癌的进展。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.11

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