盐霉素通过调节β-catenin和mTOR信号通路抗前列腺癌干细胞的机理
本文选题：PC-3 + 盐霉素 ； 参考：《南华大学》2014年硕士论文
【摘要】：目的：研究盐霉素对前列腺癌细胞系PC-3在体外的克隆形成能力的影响及其与β-catenin和mTOR信号通路的关系,探讨盐霉素抗前列腺癌干细胞的作用机制。 方法：盐霉素处理呈对数生长的前列腺癌细胞系PC-3,观察其克隆形成变化；采用流式分析仪检测盐霉素处理PC-3后肿瘤干细胞比例的变化；用WesternBlot法检测盐霉素处理后前列腺癌细胞中的β-catenin和mTOR信号通路的蛋白表达变化；实时定量PCR法检测盐霉素处理后前列腺癌细胞中β-catenin信号通路的靶基因表达水平变化；比较ALDHhigh亚群和ALDHlow亚群克隆形成变化；GSK3抑制剂和雷帕霉素分别处理PC-3,观察其对克隆形成能力的影响并检测其肿瘤干细胞比例的变化。 结果：①盐霉素对前列腺癌细胞克隆形成能力的影响：浓度分别为0、0.25uM、0.5uM、luM、2uM和4uM的各处理组的克隆形成数分别为41、39、36、30、18和9。②盐霉素对PC-3中肿瘤干细胞比例的影响：流式细胞仪分析结果显示荧光阴性对照组肿瘤干细胞比例均值为0.05%,空白对照组肿瘤干细胞比例均值为7.40%,盐霉素4uM处理12h组肿瘤干细胞比例均值为1.86%,通过两样本均数t检验,空白对照组与实验组之间差异具有统计学意义(p0.05)。③盐霉素对不同干细胞亚群细胞增殖能力的影响：ALDHhigh亚群的细胞较ALDHlow亚群具有更强的增殖能力,且盐霉素对前列腺癌干细胞具有选择性杀伤作用,ALDHhigh亚群和ALDHlow亚群的空白组与盐霉素处理组的克隆数分别为20、4、9和5。④盐霉素对PC-3干细胞的β-catenin和mTOR信号通路的影响：克隆形成实验中,空白对照组、盐霉素组、雷帕霉素组和GSK3抑制剂组的克隆数分别为80、51、70和124,流式细胞分析仪检测干细胞比例变化,GSK3抑制剂组高表达ALDH细胞达9.35%,雷帕霉素组中高表达ALDH的比例为1.62%,雷帕霉素+盐霉素组中肿瘤ALDH高表达比例为0.94%,而GSK3抑制剂+盐霉素组的比例为2.95%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论：(1)盐霉素可以抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖,并能有效抗其肿瘤干细胞；(2)盐霉素对β-catenin和mTOR信号通路的抑制作用很有可能是其抗前列腺癌细胞及其干细胞的作用机制之一。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of salinomycin on the clone formation of prostate cancer cell line PC-3 in vitro and its relationship with 尾 -catenin and mTOR signaling pathway, and to explore the mechanism of salinomycin against prostate cancer stem cells.Methods: the prostate cancer cell line PC-3 which grew logarithmic was treated with salinomycin and its clone formation was observed, and the percentage of tumor stem cells treated with salinomycin was detected by flow cytometry.The changes of protein expression of 尾 -catenin and mTOR signaling pathway in prostate cancer cells treated with salinomycin were detected by WesternBlot assay, and the target gene expression level of 尾 -catenin signaling pathway in prostate cancer cells treated with salinomycin was detected by real-time quantitative PCR.The effects of GSK3 inhibitor and rapamycin on the clonal formation of PC-3 were compared with those of ALDHlow subgroup and ALDHhigh subgroup. The effects of GSK3 inhibitor and rapamycin on the clone forming ability were observed and the percentage of tumor stem cells was detected.Results the effect of 1: 1 salinomycin on the clone forming ability of prostate cancer cells: the number of clone formation in each treatment group with concentration of 0 0.25uM and 4uM were 41 ~ 39U ~ (36) 30 ~ (18) and 9.2 ~ (2) salinomycin respectively: the effect of flow fine flow on the percentage of tumor stem cells in PC-3.The mean percentage of tumor stem cells in fluorescent negative control group was 0.05, that in blank control group was 7.40, and that in salinomycin 4uM treatment group for 12 h was 1.86. The mean value of two samples was t test.The difference between the blank control group and the experimental group was statistically significant. The effect of salinomycin on the proliferation of different stem cell subsets was significant. The cell proliferation of the ALDHlow subgroup was stronger than that of the ALDHlow subgroup.Moreover, salinomycin had selective killing effect on prostate cancer stem cells. The clones of blank group and salinomycin treated group were 204n9 and 5.4 salinomycin on 尾 -catenin and mTOR signaling pathway of PC-3 stem cells, respectively.In the Clone formation experiment,Blank control group, salinomycin group,The clone numbers of rapamycin group and GSK3 inhibitor group were 80 ~ 51N 70 and 124, respectively. The percentage of stem cells detected by flow cytometry was 9.35% in GSK3 inhibitor group, 1.62% in rapamycin group and 1.62% in rapamycin group.In the salinomycin group, the proportion of tumor ALDH high expression was 0. 94%, while that of the GSK3 inhibitor salinomycin group was 2. 95%. The difference was statistically significant (P 0. 05).Conclusion 1) Salinomycin can inhibit the proliferation of prostate cancer cell line PC-3, and can effectively inhibit the proliferation of prostate cancer cell line, and can effectively inhibit the inhibition of 尾 -catenin and mTOR signaling pathway, which may be one of the mechanisms of its anti-prostate cancer cell and its stem cells.
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.25
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 张鹏伟;储消和;郭美锦;储炬;庄英萍;张嗣良;;响应面设计优化盐霉素发酵条件[J];中国抗生素杂志;2010年02期
2 陈代杰,周光悹,许文思;盐霉素生物合成的研究——Ⅰ.浅蓝菌素对盐霉素生物合成的影响[J];抗生素;1988年03期
3 陈代杰,周光悹,许文思;盐霉素生物合成的研究 Ⅱ.短链脂肪酸在盐霉素生物合成中作用机制的初步探讨[J];抗生素;1988年03期
4 蒋顺进;汤晓林;;盐霉素发酵工艺的优化研究[J];今日药学;2010年10期
5 高圣君;杭海峰;陈中兵;郭美锦;储炬;庄英萍;张嗣良;;流加葡萄糖策略对盐霉素生物合成调控影响[J];中国抗生素杂志;2013年08期
6 董秀云;徐文浩;谢志斌;殷娟;何鹏;张静;杨菲;;成功救治急性盐霉素中毒一例[J];临床合理用药杂志;2011年25期
7 刘朋;杭海峰;储消和;郭美锦;储炬;庄英萍;张嗣良;;盐霉素自身抗性高产突变菌株筛选[J];中国抗生素杂志;2012年02期
8 董秀云;徐文浩;谢志斌;殷娟;何鹏;张静;杨菲;;成功救治急性盐霉素中毒一例[J];中国全科医学;2010年32期
9 杨亚勇;蒋顺进;;提高白色链霉菌盐霉素产量的工艺研究[J];中国抗生素杂志;2006年11期
10 邵明举;邢介玲;王兴蕾;邵华;刘红;许荣廷;姜笃银;;误食盐霉素中毒致死亡1例[J];山东大学学报(医学版);2008年03期
相关会议论文 前3条
1 马立农;陈杖榴;;高效液相色谱柱前衍生化法测定饲料中的盐霉素[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
2 石永芝;王海;林建强;曲音波;;盐霉素发酵补油工艺研究[A];中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集[C];2005年
3 陈智慧;;管碟法测定饲料中盐霉素的不确定度评定[A];首届中国兽药大会动物药品学暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008学术年会论文集[C];2008年
相关重要报纸文章 前10条
1 山东鲁抗动植物生物药品事业部 张正海 孟伟民 朱志强;盐霉素的应用及前景[N];中国畜牧水产报;2000年
2 ;盐霉素的应用及前景[N];中国畜牧水产报;2001年
3 中国农业科学院饲料研究所 武书庚 张海军 李鹏 齐广海 宁夏多维药业有限公司 秦耀明;盐霉素对猪生产性能的影响[N];中国畜牧兽医报;2006年
4 ;盐霉素的应用及前景（未完待续）[N];中国畜牧水产报;2001年
5 $$四川农业大学动物营养研究所 张克英 陈代文 $$山东鲁抗动植物生物药品事业部 张正海 周庆举;盐霉素对生长猪生产性能的影响及适宜添加量的研究[N];中国畜牧水产报;2001年
6 记者 陈青 通讯员 余飞;盐霉素可抑制肝胰腺肿瘤生长[N];文汇报;2013年
7 ;盐霉素的应用及前景（未完待续）[N];中国畜牧水产报;2000年
8 ;盐霉素的应用及前景（未完待续）[N];中国畜牧水产报;2001年
9 莱州市畜牧兽医站 原丽丽;随意加大盐霉素用量不可取[N];山东科技报;2006年
10 ;盐霉素的应用及前景（未完待续）[N];中国畜牧水产报;2000年
相关博士学位论文 前1条
1 马驰;联合应用甲萘醌、维生素C和盐霉素治疗胶质瘤的体外研究[D];吉林大学;2014年
相关硕士学位论文 前10条
1 储消和;盐霉素高产菌推理选育及发酵工艺研究[D];浙江工业大学;2008年
2 张劲松;盐霉素颗粒剂工艺的改进研究[D];天津大学;2011年
3 张鹏伟;盐霉素发酵过程优化与放大研究[D];华东理工大学;2010年
4 戚凤娥;盐霉素发酵工艺的调控分析与放大[D];山东大学;2006年
5 石永芝;高脂酶活力盐霉素高产菌株选育及发酵工艺优化[D];山东大学;2005年
6 刘朋;盐霉素菌种选育和补油发酵工艺的优化[D];华东理工大学;2011年
7 赵福琴;盐霉素对家兔急性、亚慢性毒性机理的研究[D];河北农业大学;2005年
8 吴丹心;盐霉素抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导凋亡的实验研究[D];南方医科大学;2014年
9 张郭娟;盐霉素通过调节β-catenin和mTOR信号通路抗前列腺癌干细胞的机理[D];南华大学;2014年
10 苏小康;盐霉素对肝癌细胞HepG2体外抑制作用的研究[D];南华大学;2014年
，本文编号：1763789
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mjlw/1763789.html
