尿毒症毒素对HepG2细胞炎症因子及脱碘酶表达的影响

发布时间：2018-05-02 06:23

  本文选题：慢性肾功能不全 + 尿毒症毒素　； 参考：《南昌大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：探讨不同浓度尿毒症毒素对人肝癌HepG2细胞1型脱碘酶(Iodothyroninedeiodinase typeⅠ, D1)、白介素-1β(Interleukin-1beta, IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6, IL-6)及肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α) mRNA表达的影响，探寻慢性肾功能不全患者非甲状腺疾病综合征(Nonthyroidal IllnessSyndrome, NTIS)与微炎症状态之间的关系。 方法：（1）将体外培养的HepG2细胞随机分组：①空白对照组：未加任何刺激物；②低浓度尿毒症毒素刺激组（终浓度为20mmol/L尿素、100umol/L肌酐、40umol/L尿酸、0.2pg/ml甲状旁腺激素和1×10-5mol/L精脒的混合液）；③中等浓度尿毒症毒素刺激组（终浓度为50mmol/L尿素、200umol/L肌酐、80umol/L尿酸、2pg/ml甲状旁腺激素和1×10-4mol/L精脒的混合液）；④高浓度尿毒症毒素刺激组（终浓度为80mmol/L尿素、500umol/L肌酐、200umol/L尿酸、20pg/ml甲状旁腺激素和1×10-3mol/L精脒的混合液）。以上各组分别刺激12h、24h。应用RT-PCR法检测细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、D1的转录水平。（2）收集本科室已诊断为慢性肾功能不全患者和健康体检者的血液标本，ELISA法检测其血清IL-6的蛋白表达水平，并采集其临床资料。 结果：（1）①低浓度尿毒症毒素刺激HepG2细胞12h、24h后IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达均较空白对照组升高（12h组：IL-1β、IL-6、TNF-α的P值分别为0.016、0.042、0.015；24h组：IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01），而D1mRNA的表达较空白对照组降低（12h组和24h组P值均小于0.01）。中等浓度尿毒症毒素刺激HepG2细胞12h、24h后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达均较空白对照组升高（12h组和24h组IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01），，而D1mRNA的表达较空白对照组降低（12h组和24h组P值均小于0.01）。高浓度尿毒症毒素刺激HepG2细胞12h、24h后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达均较空白对照组升高（12h组和24h组IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01），而D1mRNA的表达较空白对照组降低（12h组和24h组P值均小于0.01）。②中等浓度尿毒症毒素刺激HepG2细胞12h、24h后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达均较低浓度尿毒症毒素组升高（12h组：IL-1β、IL-6、TNF-α的P值分别为小于0.01、0.012、小于0.01；24h组：IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01），而D1mRNA的表达较低浓度尿毒症毒素组降低（12h组P值为0.013；24h组P值小于0.01）。③高浓度尿毒症毒素刺激HepG2细胞12h、24h后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达均较低浓度尿毒症毒素组升高（12h组和24h组IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01），而D1mRNA的表达较低浓度尿毒症毒素组降低（12h组和24h组P值均小于0.01）。④高浓度尿毒症毒素刺激HepG2细胞12h、24h后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达均较中等浓度尿毒症毒素组升高（12h组和24h组IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01；24h组：IL-1β、IL-6、TNF-α的P值分别为小于0.01、0.035、0.013），而D1mRNA的表达较中等浓度尿毒症毒素组降低（12h组P值为0.011；24h组P值为0.036）。⑤低浓度、中等浓度、高浓度尿毒症毒素刺激HepG2细胞24h后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达均较刺激12h升高（低浓度组和中等浓度组IL-1β、IL-6、TNF-α的P值均小于0.01；高浓度组：IL-1β、IL-6、TNF-α的P值分别为0.011、小于0.01、0.042），而D1mRNA的表达较刺激12h降低（低浓度组P值为0.038；中等浓度组P值为0.017；高浓度组P值为0.038）。（2）根据ELISA法检测人血清IL-6表达水平与估算的肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate, eGFR)值、游离三碘甲状腺原氨酸(Free triiodothyronine, FT3)等临床资料的研究结果发现，eGFR值与血清FT3浓度呈正相关(相关系数r=0.465, P＜0.01)，eGFR值与血清IL-6浓度呈负相关(相关系数r=-0.764, P＜0.01)，血清IL-6与FT3浓度呈负相关(相关系数r=-0.643, P＜0.01)。 结论：在一定浓度、时间范围内，随着尿毒症毒素浓度的增高、刺激时间的延长，HepG2细胞IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达增强，D1mRNA的表达减弱。根据ELISA法检测人血清IL-6蛋白表达水平与收集临床资料分析发现慢性肾功能不全患者eGFR值与其血清FT3浓度呈正相关，eGFR值与血清IL-6浓度呈负相关，血清IL-6与FT3浓度呈负相关，即随着慢性肾功能不全患者的eGFR值降低、血清IL-6水平的升高，其血清FT3浓度降低。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of different concentrations of uremia on the expression of 1 , D1 , Interleukin - 1尾 , IL - 1尾 , Interleukin - 6 , IL - 6 and Tumor Necrosis Factor - 伪 ( TNF - 伪 ) mRNA in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells .

Methods : ( 1 ) HepG2 cells cultured in vitro were randomly divided into : 鈶

本文编号：1832716