Capn4在肾透明细胞癌中的表达及其在侵袭转移中的功能研究

发布时间：2018-05-04 00:37

  本文选题：Capn4肾透明细胞癌 + 侵袭　； 参考：《苏州大学》2014年博士论文

【摘要】：肾细胞癌（renal cell carcinoma，RCC）是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，大约有70%的肾细胞癌是透明细胞肾细胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC），转移是肾细胞癌导致死亡的主要原因，而肾癌发生转移的机制尚不清楚。μ-型钙蛋白酶（μ-calpains）在哺乳动物各组织中广泛表达，它是一种由催化亚基和调节亚基组成的异源二聚体，其中小的调节亚基为钙蛋白酶小亚基-1（Calpain small subunit1，Capn4）。研究发现Capn4在促进细胞的迁移、增殖和分化中发挥重要作用，已经发现其在肝癌、胆管癌及乳腺癌的转移过程中发挥重要作用。本研究应用人肾透明细胞癌组织标本及细胞模型，检测Capn4在肾透明细胞癌组织中的表达水平，并分析Capn4表达与预后的相关性；研究Capn4对肾透明细胞癌细胞趋化运动及迁移、侵袭能力的影响，并初步探讨可能的作用机制，以期找到肾透明细胞癌新的预后标志物和有效的治疗靶点。 第一部分Capn4在肾透明细胞癌中的表达及临床意义 目的：研究肾透明细胞癌组织及癌旁组织中Capn4的表达，分析其与临床病理特征之间的关系，探讨其与ccRCC患者临床预后的关系。 方法：采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction，qRT PCR)、Western blotting及免疫组化检测75例ccRCC组织和癌旁正常肾组织的Capn4的基因及蛋白表达情况，并对其进行比较和相关分析。 结果: qRT-PCR、Western blotting结果显示：ccRCC组织与正常肾组织中均有Capn4的基因和蛋白表达，在ccRCC组织中Capn4的表达明显高于癌旁组织，差异具有统计学意义。免疫组化检测结果显示Capn4的表达与ccRCC的分期、分级、淋巴结转移、肿瘤大小及局部侵润有关，Capn4与ccRCC患者生存期之间Kaplan-Meier生存曲线分析提示，Capn4高表达组的ccRCC患者的生存率低于Capn4低表达组患者，差异有统计学意义。 结论：人ccRCC中Capn4高表达，，其表达水平与肾癌的分期及淋巴结转移相关；Capn4高表达患者预后较差，生存期较短，提示Capn4高表达在肾透明细胞癌中可能具有重要意义。 第二部分Capn4在肾透明细胞癌侵袭转移中的作用及机制探讨 目的：通过检测Capn4对肾透明细胞癌细胞增殖、运动、粘附及迁移侵袭能力的影响，初步探讨Capn4在肾透明细胞癌侵袭转移中的作用及机制，以期找到肾透明细胞癌新的预后标记物和治疗靶点。 方法： 1.qRT PCR方法检测786-0、ACHN、Caki-1、Caki-2四种不同转移潜能的肾癌细胞系中Capn4的表达水平。 2.应用合成的小干扰RNA质粒转染786-0肾癌细胞，建立Capn4稳定降表达细胞系，用qRT PCR技术检测转染效率。 3.采用CCK-8检测Capn4降表达对786-0肾癌细胞增殖能力的影响。 4.“伤口愈合”实验检测Capn4降表达对786-0肾癌细胞运动能力的影响。 5.用粘附实验检测Capn4降表达对786-0肾癌细胞间，细胞与细胞外基质之间粘附能力的影响。 6.Transwell体外侵袭实验检测Capn4降表达对786-0肾癌细胞侵袭能力的影响。 7.用Western blotting方法检测Capn4降表达对ERK1/2、p-ERK1/2、MMP-2及MMP-9表达的影响，初步探讨Capn4影响肾癌细胞转移浸润的机制。 结果：qRT PCR检测发现Capn4在786-0、ACHN、Caki-1、Caki-2四种不同转移潜能的肾癌细胞系中均有表达，且在786-0中表达最高。小干扰RNA技术转染786-0肾癌细胞后，建立Capn4稳定降表达细胞系，qRT PCR检测Capn4表达明显下降。Capn4降表达明显抑制786-0肾癌细胞增殖，且Capn4降表达的786-0肾癌细胞与对照组相比，其运动、粘附及侵袭能力均减弱。Capn4降表达减弱了ERK1/2磷酸化水平，降低了基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9的表达。 结论：Capn4降表达后786-0肾癌细胞增殖、运动、迁移、粘附及侵袭能力均受到显著抑制，显示Capn4参与对肾癌细胞的趋化运动和转移能力的调控。Capn4可能是通过持续激活ERK1/2，而使MMP-2和MMP-9的表达显著增加，增强人786-0肾癌细胞系细胞的侵袭能力。Capn4有望成为判断肾透明细胞癌预后的重要标志物及新的治疗靶点。
[Abstract]:Renal cell carcinoma ( RCC ) is one of the most common malignant tumors in urinary system . About 70 % of renal cell carcinoma is clear cell renal cell carcinoma ( ccRCC ) , and metastasis is the main cause of death due to renal cell carcinoma . It was found that Cap4n4 plays an important role in promoting cell migration , proliferation and differentiation . It has been found that it plays an important role in the metastasis of liver cancer , cholangiocarcinoma and breast cancer .
To investigate the effects of Capn4 on the chemoattractant movement , migration and invasion ability of renal clear cell carcinoma cells , and to explore possible mechanism of action , with a view to finding new prognostic markers and effective treatment targets for renal clear cell carcinoma .

Expression and clinical significance of first part Capn4 in renal clear cell carcinoma

Objective : To study the expression of Cap3n4 in renal clear cell carcinoma ( RCC ) and adjacent tissues , and to analyze its relationship with clinicopathological features and to investigate the relationship between them and the clinical prognosis of ccRCC .

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本文编号：1840825