ERRγ在肾透明细胞癌中的表达及其功能学研究
本文选题：雌激素相关受体 + 肾透明细胞癌 ； 参考：《中国人民解放军医学院》2016年硕士论文
【摘要】：目的：大量相关文献研究证实细胞核受体家族在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用,同时其表达水平的变化与肿瘤预后存在密切相关。根据前期芯片结果提示,ERRy在不同分期的肾透明细胞癌中存在明显的差异化表达,而这一现象在肾透明细胞癌中的可能的作用还未见相关文献报道。本实验旨在研究核受体家族中ERRy受体在肾透明细胞癌肿瘤组织和瘤旁组织中的mRNA水平和蛋白水平表达情况及其在肾透透明细胞中的增殖侵袭相关的生物学作用。方法：选取56对肾透明细胞癌手术冰冻标本和相应癌旁正常肾实质组织,采用免疫组化、Western blot法和实时定量PCR检测ERRy在肾透明细胞癌细胞株和离体组织标本中蛋白和mRNA水平的表达情况,同时在体外培养的肾小管上皮HKC细胞系、肾透明细胞癌细胞系786-O和769-P中检测相应表达。设计慢病毒过表达质粒pLV-EGFP(2A)Puro-ESRRG和空载体对照组,构建肾透明细胞癌细胞系786-O和769-P稳定高表达ERRy的细胞株,通过MTS法、流式细胞仪和划痕试验分别检测细胞增值率、细胞周期和细胞横向迁移的变化。结果：免疫组化和western blot的检测结果表明与癌旁正常肾实质组织相比,ERRy蛋白的表达水平在肾透明细胞癌组织中明显降低,和肾小管上皮HKC细胞系相比,ERRy的表达水平在肾透明细胞癌细胞系786-O和769-P中均降低(p值均0.05);同时在临床病理中ERRy的mRNA水平与肾透明细胞癌病理的Fuhrman核分级呈显著负相关(p0.05),而且女性肾癌患者组织中的ERRymRNA表达要显著高于男性患者(p0.05)。在786-O和769-P细胞系的功能实验中,稳定高表达ERRy的细胞株与空载体转染组的细胞株相对照比较,MTS法显示前者的增值率明显降低,流式细胞仪检测显示高表达ERRy的细胞株S期细胞比例明显降低并有G0/G1细胞比例明显增加,划痕试验显示高表达ERRy后的细胞系其横向迁移生长速率明显减慢。结论：ERRy在肾透明细胞癌中的表达显著降低,其表达水平与病理Fuhrman核分级之间存在显著相关性,且明显受患者性别影响。肾透明细胞癌的肿瘤发生发展中ERRy可能发挥了抑制肿瘤生长的作用。
[Abstract]:Objective: the nuclear receptor family plays an important role in the occurrence and development of many kinds of tumors, and the expression level of nuclear receptor family is closely related to the prognosis of tumor. According to the results of early microarray, there is obvious differential expression of ERRy in renal clear cell carcinoma at different stages, but the possible role of this phenomenon in renal clear cell carcinoma has not been reported. The purpose of this study was to investigate the expression of ERRy receptors in the nuclear receptor family in tumor tissues and adjacent tissues of renal clear cell carcinoma (RCC) and its biological role in the proliferation and invasion of renal transparent cells. Methods: 56 pairs of frozen specimens of renal clear cell carcinoma and normal renal parenchyma adjacent to the carcinoma were selected. The expression of protein and mRNA in renal clear cell carcinoma cell line and in vitro tissue was detected by immunohistochemistry and real-time quantitative PCR, and the renal tubular epithelial HKC cell line was cultured in vitro. The corresponding expression was detected in renal clear cell carcinoma cell lines 786-O and 769-P. Lentivirus overexpression plasmid pLV-EGFP(2A)Puro-ESRRG and empty vector control group were designed to construct renal clear cell carcinoma cell lines 786-O and 769-P with stable and high expression of ERRy. The proliferation rate was detected by MTS, flow cytometry and scratch test, respectively. Changes in cell cycle and cell transversal migration. Results: the results of immunohistochemistry and western blot showed that the expression of ERRy protein in renal clear cell carcinoma was significantly lower than that in adjacent normal renal parenchyma. Compared with the renal tubular epithelial HKC cell line, the expression level of erry in renal clear cell carcinoma cell line 786-O and 769-P decreased by 0.05, and the mRNA level of ERRy was significantly negative in clinical pathology and the Fuhrman nuclear grade of renal clear cell carcinoma was significantly lower than that of renal tubular epithelial cell carcinoma cell line 786-O and 769-P. The expression of ERRymRNA in female patients with renal cell carcinoma was significantly higher than that in male patients. In the functional experiments of 786-O and 769-P cell lines, the cell lines with stable high expression of ERRy were compared with those of the empty vector transfection group. Flow cytometry showed that the proportion of S phase cells with high expression of ERRy was significantly decreased and the proportion of G0/G1 cells was increased. Scratch test showed that the transversal migration and growth rate of cell lines with high expression of ERRy decreased obviously. Conclusion the expression of 1% ERRy in renal clear cell carcinoma was significantly decreased, and the expression level was significantly correlated with the nuclear grade of pathological Fuhrman, and was significantly affected by the sex of the patients. ERRy may play a role in inhibiting tumor growth in the tumorigenesis and progression of renal clear cell carcinoma.
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
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，本文编号：1864437
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