脑源性神经营养因子对压力性尿失禁大鼠模型控尿功能的影响

发布时间：2018-05-12 01:07

  本文选题：下尿路 + 女性　； 参考：《第二军医大学》2017年博士论文

【摘要】：一、研究背景压力性尿失禁(Stress Urinary Incontinence, SUI)是一种困扰着中老年女性的多发病,其特点为在腹压突然增加时发生尿液经尿道外口不自主地漏出。目前,阴道分娩被认为是SUI最重要的病理生理学机制之一。临床随访及动物模型研究发现,阴道分娩过程中胎儿会对盆底肌肉、神经及结缔组织造成不同程度的损伤,并影响着产后SUI的发生。长期临床随访研究表明,在产后5-7年出现SUI的女性中,阴部神经动作电位潜伏期明显延长,这意味着尿道外括约肌(External Urethral Sphincter, EUS)的神经支配仍处于不完全恢复状态。这一结果也进一步得到了我们的前期研究的证实,即当双重损伤SUI大鼠模型的EUS功能和尿道阻力已经恢复至正常范围时,形态学研究仍可观察到EUS的神经支配处于异常状态。上述结果均强调出了阴道分娩过程中与控尿相关神经损伤的重要性,这也提示恢复这些神经的功能可能将成为临床治疗的核心内容。在促进神经的生长、存活及损伤后的再生修复过程中,脑源性神经营养因子(Brain-derived Neruotrophic Factor, BDNF)发挥着关键性的作用。此外,它还是一种参与下尿路神经调控的重要神经调制,它与多种下尿路功能障碍性疾病的病理生理学过程相关,包括:膀胱过度活动症、SUI、间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征及神经源性膀胱等。不仅如此,动物模型研究也表明阴部神经的损伤后修复需要BDNF的参与。因此,在本研究中我们选择了 BDNF为切入点探索它对SUI大鼠模型控尿功能的影响。二、研究目的本研究旨为探索BDNF对双重损伤SUI大鼠模型控尿功能的影响。其结果将进一步解释神经源性异常在临床SUI发生机制中的重要地位,并为开发新的临床治疗方法提供理论依据,同时也将为预防SUI的发生提供一种全新的思路。本研究包括以下3部分:第一部分:研究局部应用外源性BDNF对SUI大鼠模型的阴部神经进行局部治疗对其控尿功能及神经恢复的影响。第二部分:探索短期单次阴部神经运动支电刺激对大鼠阴部神经核团BDNF表达及其下尿路功能的影响。第三部分:探索长时程周期性阴部神经电刺激对BDNF表达及SUI大鼠模型控尿功能及神经恢复的影响。三、研究设计第一部分:将93只雌性、年龄相近的SD大鼠随机分为以下3组:SUI模型+BDNF治疗组、SUI模型+生理盐水治疗组、假损伤模型+生理盐水治疗组。SUI模型的建立包括双侧阴部神经损伤(Pudendal Nerve Crush, PNC)和持续4小时的阴道扩张(Vaginal Distension, VD)。BDNF和生理盐水的给予采用的是植入式mini-osmotic泵对双侧损伤的神经进行历时2周或3周的局部治疗。假损伤组除不进行PNC和VD外,其余操作均与模型组相同。对上述的一部分大鼠将进行漏尿点压(Leak Point Pressure, LPP )与 EUS 肌电图(Electromyography, EMG )的同步测定,完毕后收取EUS组织进行神经肌肉接头的荧光染色形态学分析;另一部分动物将分别于4天、8天和12天时通过定量PCR和免疫荧光的手段检测BDNF和βⅡ微管蛋白的表达。组间差异分析将采用双因素的方差分析合并Holm-Sidak事后多重比较,P0.05定义为有统计学差异。第二部分:将46只雌性成年大鼠随机分为2组:双重损伤SUI大鼠模型组(n=23)和对照损伤假手术组(n=23),并即刻予以为期1小时的单侧阴部神经运动支电刺激(左侧神经电刺激,右侧无电刺激)。完毕后,对一部分大鼠予以膀胱和肛门外括约肌的功能学测定;另一部分大鼠在接受电刺激治疗后,于2天和1周时,进行双侧阴部神经核团内BDNF和βⅡ微管蛋白的定量检测。组间统计学分析采用的是两因素的方差分析合并Student-Newman-Keuls事后多重比较。对于BDNF和βⅡ微管蛋白的定量数据相对量的比较采用的是单样本t检验,P0.05表明有统计学差异。第三部分:将60只年龄、体重相仿的雌性SD大鼠随机分为两组:SUI模型组(n=34只)和对照损伤假手术组(n=26只),模型建立后立即予以双侧阴部神经电极植入。随后,将其中一部分大鼠随机分为3组:SUI+双侧电刺激组、SUI+无电刺激组、假损伤+无电刺激组。两周后,对各组的大鼠进行膀胱功能与控尿功能的检测。另一部分大鼠在双侧电极植入后即刻开始对左侧阴部神经进行历时1小时的单侧电刺激,而右侧不予以电刺激作为对照,在2天、1周和2周时,用定量PCR法检分析阴部神经核团内BDNF和βⅡ微管蛋白的基因表达量。对左右侧Onuf's核团内BDNF与βⅡ微管蛋白mRNA表达的比较采用的是单样本的t检验。对双侧阴部神经电刺激后的膀胱及控尿功能检测指标的组间比较采用的是双因素的方差分析合并Student-Newman-Keuls事后多重比较的方法,P0.05代表有统计学差异。四、研究结果第一部分:局部予以BDNF治疗不但可有助于大鼠控尿功能的早期恢复,还可改善EUS和神经肌肉接头的组织学形态。不仅如此,BDNF局部治疗可提高阴部神经核团内BDNF与βⅡ微管蛋白mRNA的表达量。第二部分:短期单次阴部神经运动支电刺激可显著改善模型鼠的膀胱和肛门外括约肌功能,在给予电刺激的左侧阴部神经核团内BDNF与βⅡ微管蛋白mRNA的表达均较右侧有显著的提高。第三部分:长时程周期性阴部神经电刺激可显著提升Onuf s核团内BDNF与βⅡ微管蛋白mRNA的表达量,并有助于模型鼠控尿功能的早期恢复。此外,双侧阴部神经电刺激还有助于改善大鼠的膀胱和尿道功能。五、研究结论本课题通过局部运用外源性BDNF治疗及短期、长期阴部神经电刺激疗法三部分表明BDNF对SUI大鼠模型的控尿功能起着重要的作用,这主要体现在它促进了阴部神经、LPP及EUS EMG的早期恢复。因此,调节BDNF的表达可为临床SUI的治疗及预防提供一条全新的思路,本研究结果也为这一临床转化研究提供了有力的证据支撑。
[Abstract]:涓，

本文编号：1876429