草酸钙晶体引起肾小管上皮细胞紧密连接损伤与TRPV5变化的调节机制

发布时间：2018-05-19 14:28

  本文选题：草酸钙晶体 + 肾小管上皮　； 参考：《广东医学》2017年14期

【摘要】：目的探讨草酸钙晶体黏附肾小管上皮引起紧密连接(TJs)损伤与TRPV5变化的调节机制。方法利用一水草酸钙晶体(COM)暴露犬肾小管上皮细胞(MDCK)及TRPV5稳定过表达HEK-293细胞,2 mmol/L EGTA处理构建细胞TJs损伤模型;采用Western blot、荧光免疫、偏光显微镜等手段,分别检测TJs主要结构蛋白、Na~+-K~+-ATPase、TRPV5、晶体黏附量等指标,评估草酸钙晶体引起肾小管上皮细胞TJs损伤及TRPV5表达的变化。结果 COM呈下调MDCK细胞TJs蛋白Occludin和ZO-1表达水平(P0.01)。TJs损害后,COM黏附增加(P0.05);Na~+-K~+-ATPase介导TJs修复,在1 min时表达最强,随着TJs修复完成而逐步减弱,晶体黏附力也逐渐减弱(P0.01)。COM与TRPV5稳转HEK-293细胞株共培养,下调TRPV5总蛋白及膜蛋白表达水平(P0.01)。结论草酸钙晶体引起肾小管上皮细胞之间的TJs受损,促进草酸钙晶体黏附;细胞极性破坏,TRPV5膜蛋白转运失调,最终引起TRPV5膜蛋白表达减少。尿钙增加,负反馈激发Na~+-K~+-ATPase表达使TJs进入修复环节;随着TJs的自我修复,草酸钙晶体黏附减少。
[Abstract]:Objective to investigate the mechanism of TJs damage induced by calcium oxalate crystal adhesion to renal tubule epithelium and the change of TRPV5. Methods using calcium oxalate monohydrate to expose canine renal tubular epithelial cells (MDCK) and TRPV5 stable overexpression HEK-293 cell line 2 mmol/L EGTA to construct cell TJs injury model, Western blot, fluorescence immunoassay, polarizing microscope, etc. The changes of TJs damage and TRPV5 expression in renal tubular epithelial cells induced by calcium oxalate crystals were evaluated by detecting the main structural protein of TJs, Na ~ -K ~ -AT Paseate TRPV5 and the amount of crystal adhesion. Results COM down-regulated the expression level of TJs protein Occludin and ZO-1 in MDCK cells. After P0.01TJs damage, com adhesion increased and TJs repair was mediated by Na ~ -K ~ -ATPase mediated by P0.05K ~ -ATPase. The expression of TJs was strongest at 1 min, and gradually weakened with the completion of TJs repair. The adhesion force of crystal was also decreased gradually. Com and TRPV5 stabilized HEK-293 cell line co-culture, and down-regulated the expression level of TRPV5 total protein and membrane protein (P0.01). Conclusion calcium oxalate crystals can damage TJs between renal tubular epithelial cells and promote the adhesion of calcium oxalate crystals, and the cell polarity disrupts TRPV5 membrane protein transport disorder, and finally leads to the decrease of TRPV5 membrane protein expression. The increase of urine calcium and negative feedback stimulated the expression of Na ~ -K ~ -ATPase made TJs enter the repair stage, and the adhesion of calcium oxalate crystals decreased with the self-repair of TJs.
【作者单位】： 广州医科大学附属第一医院泌尿外科广东省泌尿外科重点实验室广州市泌尿外科研究所;
【基金】：广东省优秀青年教师培养计划项目(编号:B158027) 广州市科技计划项目(编号:201610010169) 广州市市属高校科研项目(编号:1201620038)
【分类号】：R692.4

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本文编号：1910460