SOCCs对DO膀胱逼尿肌细胞兴奋性和收缩性调控的初步研究

发布时间：2018-06-13 08:49

  本文选题：膀胱过度活动症 + 逼尿肌细胞　； 参考：《第三军医大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的： 膀胱过度活动症（Overactive bladder，OAB）是一种常见的泌尿外科疾病，其定义为：OAB是一种以尿急症状为特征的症候群，常常伴有尿频和夜尿症状，可伴或不不伴有急迫性尿失禁，，OAB可独立发生，也可与其他泌尿系统疾病（如尿路感染、老年性排尿异常、神经源性膀胱、下尿路梗阻、间质性膀胱炎、下尿路肿瘤、泌尿系结石、不明原因的男女性尿频）相伴发生。OAB病因不明，目前存在神经源性和肌源性两种学说，前者被广泛接纳但仍有不能解释的疑问，后者在近年来被广泛关注。OAB的主要病理生理学改变是逼尿肌过度活动（detrusor overactivity， DO）。 钙离子（Ca2+）是细胞内一种重要的无机阳离子，Ca2+参与了细胞的许多生理活动以及生理功能，在这其中，平滑肌的收缩性和兴奋性的调节是一项重要作用。在钙离子通道中，钙库调控的钙离子通道（Store Operated Calcium Channels， SOCCs）参与了血管平滑肌、呼吸道平滑肌的收缩和兴奋的调控，进过论证，我们推测SOCCs可能在膀胱逼尿肌细胞的兴奋性和收缩性的调节中发挥了重要作用，但是目前缺乏相关的证据。 因此，我们通过研究SOCCs在DO时的SD大鼠膀胱逼尿肌中的功能改变，探索SOCCs在OAB发生的机制和病理生理改变中的作用。 方法： 1.建立DO模型：取60只体质量为180-200g的雌性SD大鼠，其中30只作为对照组，其余30只行下尿路部分梗阻（partial bladder outlet obstruction，PBOO）手术，术后6周通过膀胱测压法鉴定，选取其中出现不稳定收缩的，即为DO模型，组成DO组； 2.膀胱逼尿肌离体肌条实验：利用离体肌条牵拉实验，采用SOCCs激动剂CPA和抑制剂SKF-96365干预，观察SOCCs对膀胱逼尿肌离体肌条自发收缩情况（包括收缩频率和收缩幅度）的影响，并对两组的结果进行统计学比较； 3.全细胞膜片钳实验：通过2步法急性酶分离法分离得到膀胱逼尿肌细胞，分离得到的逼尿肌细胞采用全细胞膜片钳技术，观察其SOCCs电流，并用其激动剂CPA和和抑制剂SKF-96365进行干预，观察SOCCs电流的变化情况，并对两组的结果进行统计学比较； 4.钙负载实验：通过1步法急性酶分离法分离的膀胱逼尿肌细胞，培养24h后，用Fluo-4AM荧光染色，用激光共聚焦显微镜观察逼尿肌细胞内的钙离子荧光，用CPA和SKF-96365进行干预，观察细胞内钙离子荧光变化情况，并对两组的结果进行统计学比较； 结果： 1. DO模型建立成功，通过膀胱测压，30只进行PBOO手术的雌性SD大鼠有25只出现不稳定收缩，成为DO模型大鼠； 2.膀胱逼尿肌离体肌条实验提示，采用CPA激活SOCCs后，离体逼尿肌肌条自发收缩频率加快，幅度降低，采用SKF-96365抑制SOCCs后，离体逼尿肌肌条自发收缩频率减慢，幅度回升，DO组与对照组相比，其自发收缩频率的变化有显著差异（P0.05），而收缩幅度的变化差异不显著； 3.全细胞膜片钳实验提示，成功分离大鼠膀胱逼尿肌细胞，并记录到CPA可激发SOCCs电流，SKF-96365可使SOCCs电流降低，两组组相比，DO组在+20mv和-80mv的电流密度显著高于对照组（P0.05）; 4.钙负载实验提示：成功培养了原代膀胱逼尿肌细胞，利用激光共聚焦显微镜观察可知CPA可增加细胞内的钙离子浓度[Ca2+]i，SKF-96365可降低细胞内钙离子浓度[Ca2+]i，两组相比较，DO组的[Ca2+]i显著高于对照组（P0.05）。 结论： 1. SOCCs参与调控了膀胱逼尿肌的收缩性和兴奋性； 2. DO时，SOCCs活性发生改变； 3. SOCCs在DO时活性增强，为OAB病因及病理生理学研究提供了新的思路。
[Abstract]:Objective:
Overactive bladder (OAB) is a common disease in the Department of urology. Its definition is that OAB is a symptom characterized by urgent urination, often accompanied by frequency of urination and nocturia, with or without urgent incontinence, OAB can occur independently, and can also be associated with other urinary tract diseases (such as urinary tract infection, senile sex). Abnormal urination, neurogenic bladder, lower urinary tract obstruction, interstitial cystitis, lower urinary tract tumor, urinary calculi, unexplained frequency of male and female urinary frequency) associated with unknown.OAB etiology, there are two doctrines of neurogenic and muscular origin, the former is widely accepted but still have unexplained questions, the latter has been widely concerned in.OAB in recent years. The main pathophysiological change is detrusor overactivity (DO).
Calcium ion (Ca2+) is an important inorganic cation in cells. Ca2+ participates in many physiological and physiological functions of cells. In this, the regulation of contractility and excitability of smooth muscle is an important role. In calcium channel, calcium ion channel (Store Operated Calcium Channels, SOCCs) participates in blood in calcium channel. The regulation of smooth muscle, contraction and excitement of the smooth muscle of the respiratory tract has been demonstrated. We speculate that SOCCs may play an important role in the regulation of excitability and contractility of the bladder detrusor cells, but there is no relevant evidence at present.
Therefore, we explored the role of SOCCs in the pathogenesis and pathophysiological changes of OAB by studying the functional changes of SOCCs detrusor in SD rats at DO.
Method锛

本文编号：2013433