miR-1236模拟物转染对前列腺癌细胞生长影响

发布时间：2018-09-18 20:28

【摘要】：目的 miR-1236为新发现的具有肿瘤抑制作用的RNA。本研究旨在探讨外源性miR-1236转染对前列腺癌细胞p21基因的激活作用及对其生长的影响。方法根据对前列腺癌细胞的不同处理分为阴性对照组(转染dsControl)和实验组(转染miR-1236)2组。qRT-PCR检测p21、细胞周期依赖性激酶CDK4和CDK6mRNA的表达变化。蛋白质印迹检测p21、CDK4和CDK6蛋白的表达变化。流式细胞术检测细胞周期分布。MTS法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞增殖能力。结果与dsControl组相比,转染miR-1236后2种细胞中p21mRNA表达分别上调2.16(t=12.67,P0.01)和2.26倍(t=10.93,P0.01);CDK4mRNA的表达分别下调0.56(t=6.617,P0.01)和0.43倍(t=5.698,P0.01);CDK6mRNA的表达分别下调0.78(t=3.101,P0.05)和0.71倍(t=3.841,P0.01)。蛋白质印迹检测结果与qRT-PCR结果相符。流式细胞术结果显示,转染miR-1236后,位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,位于G0/G1期的细胞比例明显增大。MTS法显示,与dsControl组相比,转染miR-1236 2种细胞活力明显下降。dsControl组DU145和PC-3细胞形成的集落数分别为241±37.64和254.33±38.18;miR-1236组DU145和PC-3细胞形成的集落数明显减少,分别为99.67±34.2(t=3.939,P0.05)和81±35.55(t=4.354,P0.05),提示细胞增殖能力降低。结论外源性miR-1236能通过激活前列腺癌细胞中p21蛋白的表达并显著抑制其生长,可能成为前列腺癌基因靶向治疗的新靶点。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of exogenous microRNAs-1236 transfection on p21 gene activation and growth in prostate cancer cells. Methods According to the different treatment of prostate cancer cells, microRNAs-1236 were divided into two groups: negative control group (transfected with dsControl) and experimental group (transfected with microRNAs-1236). The expression of p21, CDK4 and CDK6 mRNA was detected by CR. The expression of p21, CDK4 and CDK6 proteins was detected by Western blot. Cell cycle distribution was detected by flow cytometry. Cell viability was detected by MTS, and cell proliferation was detected by colony forming assay. Results Compared with dsControl group, p21mR was detected in the two kinds of cells after transfection of Mi-1236. The expression of NA was up-regulated by 2.16 (t = 12.67, P 0.01) and 2.26 times (t = 10.93, P 0.01), the expression of CDK4 mRNA was down-regulated by 0.56 (t = 6.617, P 0.01) and 0.43 times (t = 5.698, P 0.01), the expression of CDK6 mRNA was down-regulated by 0.78 (t = 3.101, P 0.05) and 0.71 times (t = 3.841, P 0.01), respectively. After R-1236, the proportion of cells in S phase and G2/M phase decreased significantly, and the proportion of cells in G0/G1 phase increased significantly. MTS assay showed that the viability of the transfected microarray-1236 cells decreased significantly compared with the dsControl group. The number of colonies formed by DU145 and PC-3 cells in dsControl group were 241 (+ 37.64) and 254.33 (+ 38.18), DU145 and PC-3 cells in microarray-1236 were formed, respectively. The number of colonies in prostate cancer cells decreased significantly, which were 99.67 (+ 34.2) (t = 3.939, P 0.05) and 81 (+ 35.55) (t = 4.354, P 0.05), suggesting that the proliferation of prostate cancer cells was decreased.
【作者单位】： 鄂东医疗集团黄石市中心医院(湖北理工学院附属医院)泌尿外科肾脏疾病发生与干预湖北省重点实验室;
【分类号】：R737.25

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