自噬对碘对比剂致人肾小管上皮细胞毒性的作用

发布时间：2018-11-28 12:59

【摘要】：目的 本实验以碘海醇(200mgI/ml)干预体外培养的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)建立细胞损伤模型,观察碘对比剂(iodinated contrast media, CM)致人肾小管上皮细胞损伤中的自噬现象,并初步探讨自噬在CM致人肾小管上皮细胞损伤和凋亡中的作用。 方法 1.碘海醇(200mg Ⅰ/m1)分别干预HK-2细胞3h,6h,建立细胞损伤模型。Westen Blot检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ)、自噬相关蛋白Atg7的表达变化。干预6h后,LC3Ⅱ-FITC荧光共聚焦显微镜观察LC3Ⅱ标记的自噬体形成,透射电镜观察细胞自噬体形成。 2.碘海醇(200mgⅠ/ml)干预HK-2细胞6h建立细胞损伤模型,应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)10mmol/1共处理细胞抑制自噬。同上采用Westen Blot检测LC3Ⅱ、Atg7表达；细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞损伤程度；Annexin Ⅴ-FITC结合流式细胞计数检测细胞凋亡比例。 结果 1.碘海醇(200mg Ⅰ/ml)干预6h后,透射电镜可观察到HK-2细胞质内自噬体的增多,共聚焦显微镜下观察到LC3Ⅱ标记的自噬体的形成。与正常对照组相比,碘海醇干预组HK-2细胞3h、6h白噬相关蛋白LC3Ⅱ、Atg7表达显著上调(P0.05),并呈时间依赖性。 2.3-MA可明显抑制HK-2细胞自噬,单纯3-MA干预组与正常对照组相比,以及碘海醇+3-MA干预组与单纯碘海醇干预组相比,自噬标志蛋白LC3Ⅱ以及Atg7表达均明显下调(P0.05,P0.05)。同时,与单纯碘海醇干预组相比,加用用3-MA抑制自噬后,细胞上清液LDH明显升高(P0.05),HK-2细胞凋亡率明显增加(P0.05)。 结论 1.碘对比剂(碘海醇,200mgⅠ/ml)呈时间依赖性诱导HK-2细胞发生白噬。 2.自噬抑制加重碘对比剂所致的HK-2细胞损伤和凋亡。 3.自噬激活可能减轻碘对比剂所致的HK-2细胞损伤和凋亡,对HK-2细胞具有保护作用。
[Abstract]:Objective to establish an injury model of human proximal renal tubular epithelial cells (HK-2) with iodohexol (200mgI/ml) in vitro and observe the iodine contrast agent (iodinated contrast media,. To explore the role of autophagy in CM induced injury and apoptosis of human renal tubular epithelial cells. Method 1. 200mg 鈪，

本文编号：2362895