ROCK2 siRNA对自发性高血压大鼠勃起功能的影响

发布时间：2018-11-28 13:39

【摘要】：目的：阴茎勃起是一个复杂的生理过程。目前已发现多种信号通路与阴茎勃起有关，包括NOS/NO信号通路、RhoA/Rho激酶通路、HO/CO通路和硫化氢通路等。RhoA/Rho激酶可通过钙离子敏感机制参与阴茎勃起过程，使海绵体血管平滑肌收缩，从而影响阴茎勃起。Rho激酶有两种亚型：ROCK1和ROCK2。很多疾病均可引起勃起功能障碍（ErectileDysfunction，ED），高血压是其中一个重要的病因。本实验研究阴茎海绵体内注射特异阻断ROCK2基因的表达的siRNA后对自发性高血压大鼠（SHR）勃起功能的影响。方法：购买12周龄的WKY及SHR雄性大鼠各30只，随机分为6组，每组10只，A组为WKY对照组、B组为WKY+GFP组、C组为WKY+siRNA组、D组为SHR对照组、E组为SHR+GFP组、F组为SHR+siRNA组。大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠，剂量为50mg/kg，麻醉显效后显露出大鼠阴茎海绵体，使用微量注射器（20ul），A组和D组作为对照组，B组和E组给予阴茎海绵体内注射20ul GFP（滴度为3×108TU/ml），C组和F组给予阴茎海绵体内注射20ul siRNA（滴度为3×108TU/ml），双侧海绵体内缓慢注射，每侧10ul，注射完毕后保留3分钟，拔出针头后压迫止血。1周后，大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠，剂量为50mg/kg，麻醉显效后，将左侧颈总动脉充分游离并暴露，使用连接好压力感受器的30G针头，充满肝素盐水后穿刺左颈总动脉，RM6240信号系统持续监测记录平均动脉压（MAP）；剪开阴茎背侧正中至耻骨联合上缘的皮肤，腹侧剪至阴囊上方，游离出阴茎。沿腹部正中线打开腹腔，，在前列腺的后外侧找出盆腔神经节（major pelvic ganglion，MPG），作为电刺激部位。使用24G针头穿刺右侧海绵体，连接压力转换器，ICP基线稳定后给予不同的电刺激MPG（电刺激参数：电压3v、5v，波幅5ms，频率12Hz，连续1min，刺激时间间隔3min），RM6240系统记录大鼠的海绵体内压/平均动脉压（ICP/MAP）的变化。心脏取血2ml检测血清睾酮值。阴茎海绵体组织冰冻切片，DAPI染色后在荧光显微镜下观察绿色荧光。制作海绵体组织匀浆，使用一氧化氮合酶试剂盒和酶标仪检测一氧化氮合酶(NOS)活性。通过免疫组化和western blot检测ROCK2、eNOS、p-eNOS在阴茎海绵体内的表达。结果：各组的体重、睾酮值均没有显著差异。ICP/MAP在A组、B组、C组三组之间差异均没有显著性，而F组与D组和E组间的差异有显著性（P0.05）。B组、C组、E组和F组海绵体组织可观察到绿色荧光，而A组和D组未见绿色荧光。检测各组NOS活性，C组与A组和B组间的差异有显著性，F组与D组和F组间的差异有显著性（P0.05）。免疫组化检测到ROCK2主要表达在阴茎海绵体平滑肌细胞的胞浆，eNOS主要表达在血管内皮细胞，p-eNOS也主要表达在血管内皮细胞。western blot检测ROCK2的表达，发现C组与A组和B组间的差异有显著性（P0.05），F组与D组和E组间的差异也有显著性（P0.05）。C组的eNOS蛋白和p-eNOS蛋白较A组和B组的差异有显著性。F组的eNOS和p-eNOS较D组和E组的差异有显著性。结论：siRNA阻断ROCK2基因表达可以抑制海绵体组织内ROCK2蛋白的表达，引起eNOS和p-eNOS的表达增强，显著增强SHR ED大鼠的勃起功能。
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【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R544.1

【共引文献】