慢性肾衰竭大鼠主动脉弹性功能与MMP-2表达关系的研究

发布时间：2019-01-28 12:50

【摘要】：目的：心血管疾病（cardiovascular disease，CVD）是慢性肾衰竭患者最常见的并发症和最主要的致死原因，占慢性肾衰竭患者全因死亡的50%。血管弹性功能减低与慢性肾衰竭患者心血管死亡率相关，其与血管壁弹性蛋白的降解关系密切。多种蛋白酶可以降解弹性蛋白，其中主要是基质金属蛋白酶-2（MMP-2），但目前关于慢性肾衰竭动脉弹性功能与MMP-2表达之间的关系尚不明确。本研究旨在通过检测慢性肾衰竭大鼠主动脉弹性功能与相应部位MMP-2表达，探讨二者之间的关系，为临床治疗提供靶点。方法： 1实验大鼠购自河北医科大学动物实验中心的20只清洁级、健康、7周龄的雄性SD大鼠，于河北医科大学第四医院动物中心屏障环境适应性饲养1周。 2分组及造模分组将20只SD大鼠随机分为3组，即正常对照组（6只），慢性肾衰竭组（7只），慢性肾衰竭血管钙化组（7只）。造模正常对照组：在实验1-3周给予1.5%甲基纤维素6ml/kg每天灌胃，在4-8周给予1.5%甲基纤维素6ml/kg隔日灌胃；慢性肾衰竭组：在实验1-3周给予100mg/ml的硫酸腺嘌呤悬浊液6ml/kg每天灌胃，在实验4-8周给予1.5%甲基纤维素6ml/kg隔日灌胃；慢性肾衰竭血管钙化组：在实验1-3周给予100mg/ml的硫酸腺嘌呤6ml/kg每天灌胃，在实验4-8周给予骨化三醇200ng/kg隔日灌胃。 3实验方法对大鼠肾脏组织进行HE染色，观察肾脏结构的病理改变，化验血清尿素氮、肌酐，以判断慢性肾衰竭大鼠模型是否建立成功。测量主动脉PWV，EVG染色观察血管弹性纤维改变；主动脉MMP-2、cbfa1表达：对大鼠胸主动脉上段进行免疫组化MMP-2、cbfa1染色，检测三组血管MMP-2、cbfa1蛋白的表达情况；取胸主动脉下段用RT-PCR方法检测血管壁核心结合因子a1（cbfa1）及MMP-2mRNA的表达情况；取胸主动脉中段进行von Kossa染色检测血管壁钙化情况，取腹主动脉用邻甲酚酞络合酮比色法测定血管壁钙含量情况。 4统计分析用SPSS13.0统计学软件对所有数据进行统计学处理，实验结果用均数±标准差（x s）表示，两组间均数比较用t检验，多组间均数比较采用单因素方差分析（ANOVA），用S-N-K检验（Student-Newman-Keuls，SNK）作多组间均数两两比较，相关分析符合双变量正态分布作Pearson积差相关分析。P0.05为差异有统计学意义。结果： 1慢性肾衰竭大鼠模型的构建肾脏病理染色：正常对照组肾小球、肾小管、间质结构正常，慢性肾衰竭组和慢性肾衰竭血管钙化组肾小球发生硬化，肾小管内可见结晶。与正常对照组比较，慢性肾衰竭组、慢性肾衰竭血管钙化组血肌酐明显升高，差异有统计学意义，分别为82.3±4.73vs32.0±2.0，P0.05；87.6±3.18vs32.0±2.0，P0.05；与正常对照组比较，慢性肾衰竭组、慢性肾衰竭血管钙化组血尿素氮明显升高，差异有统计学意义，分别为18.1±1.60vs7.1±0.43，P0.05；19.0±1.78vs7.1±0.43，P0.05；与慢性肾衰竭组比较，慢性肾衰竭血管钙化组血肌酐、尿素氮升高，但差异无统计学意义，分别为87.6±3.18vs82.3±4.73，P＞0.05；19.0±1.78vs18.1±1.60，P＞0.05。 2慢性肾衰竭大鼠主动脉钙化情况 von Kossa染色发现慢肾衰血管钙化组发生明显的主动脉钙化，但是慢性肾衰竭组和正常对照组均未发生主动脉钙化。与正常对照组相比，慢性肾衰竭组主动脉钙含量升高，差异无统计学意义，为7.17±2.54vs6.46±2.14，P＞0.05；慢性肾衰竭血管钙化组主动脉钙含量显著升高，差异有统计学意义，为16.88±6.40vs6.46±2.14，P＜0.05。 3慢性肾衰竭大鼠主动脉弹性纤维的改变 EVG染色结果显示，与正常对照组比较，慢性肾衰竭组和慢肾衰竭血管钙化组主动脉弹性纤维变直，弹性纤维间的微纤维减少；与慢性肾衰竭组比较，慢性肾衰竭血管钙化组主动脉弹性纤维数量明显较少，，钙化处发生断裂。 4慢性肾衰竭大鼠主动脉弹性功能的改变与正常对照组比较，慢性肾衰竭组主动脉PWV、慢性肾衰竭血管钙化组主动脉PWV值均明显升高，差异有统计学意义，分别为5.90±0.022vs2.87±0.006，P0.05；9.032±0.041vs2.87±0.006，P0.05；与慢性肾衰竭组比较，慢性肾衰竭血管钙化组主动脉PWV值明显升高，差异有统计学意义，为9.032±0.041vs5.90±0.022，P0.05。 5慢性肾衰竭大鼠主动脉cbfa1及MMP-2的表达与正常对照组比较，慢性肾衰竭组及慢性肾衰竭血管钙化组主动脉cbfa1及MMP-2mRNA的表达均明显升高（P0.05）；与慢性肾衰竭组比较，慢性肾衰竭血管钙化组主动脉cbfa1及MMP-2mRNA的表达明显升高（P0.05）。与正常对照组比较，慢性肾衰竭组及慢性肾衰竭血管钙化组主动脉MMP-2蛋白的表达明显升高（P0.05），与慢性肾衰竭组相比，慢性肾衰竭血管钙化组主动脉MMP-2蛋白的表达明显升高（P0.05）。 6慢性肾衰竭大鼠主动脉PWV改变与相应部位血管MMP-2及钙含量的关系主动脉PWV与主动脉MMP-2蛋白表达做相关分析呈正相关（r=0.754，P=0.02）。主动脉PWV与主动脉钙含量做相关分析呈正相关（r=0.736，P=0.03）。主动脉MMP-2mRNA与主动脉cbfa1mRNA表达呈正相关（r=0.924，P=0.000）。结论： 1慢性肾衰竭大鼠主动脉弹性功能下降，与相应部位MMP-2的表达呈负相关； 2慢性肾衰竭大鼠主动脉弹性功能下降的可能的机制之一是MMP-2通过降解弹性蛋白，进而促进血管平滑肌细胞发生表型转化所致。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R692.5

【参考文献】