他莫昔芬在治疗特发性少弱精子症中抗氧化作用的研究

发布时间：2019-01-28 19:05

【摘要】：研究背景活性氧(reactive oxygen species, ROS)可引起精子线粒体损伤,使ATP生成降低,而导致精子活力下降,其造成精子活力下降的机制：一,ROS可引起线粒体膜脂质过氧化损伤,使线粒体内与ATP生成相关的酶活性改变,影响能量产生；二,ROS可造成线粒体脱落,数量减少,进而使能量合成相应降低；三,ROS可使mtDNA发生损伤,mtDNA突变将破坏其编码蛋白的合成,而这些蛋白是线粒体氧化磷酸化所必需的；四,ROS可诱导线粒体内Ca2+的释放,从而降低线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)并增加线粒体内膜通透性,进而导致膜损伤,抑制线粒体合成三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)；五,精子活力依赖于线粒体功能的完整性,磷脂是线粒体鞘的重要组成部分,一旦磷脂中的脂肪酸被活性氧氧化,精子活力将被损害。抗氧化治疗是针对于特发性男性不育症的一种常用的经验性治疗方法。尽管一些研究认为,抗氧化药物如维生素C、维生素E、左卡尼丁、谷胱甘肽等治疗特发性男性不育症是没有临床疗效的或者这种疗效仍然值得商榷。但是近期ROSS等作了荟萃分析,分析了17个临床实验,其中包括1655个实验对象,目标人群均为特发性不育男性,干预条件为抗氧化药物治疗,治疗周期为3到6个月不等,其中82%的实验结果为精液质量得到改善,其中63%的实验表现为精子活力的改善,33%的实验结果表现为精子浓度的改善,而只有17%的实验的结果表现为精子形态的改善。线粒体包含两层质膜,外层质膜能够允许大量电子流向内膜空间,高度内陷的内膜具有很大的面积可以供应线粒体氧化磷酸化,在氧化磷酸化过程中,质子从线粒体内泵向线粒体外,形成电化学梯度,称之为MMP。MMP是精子功能完整性的重要标志之一,正常的MMP也是线粒体产生ATP的一个重要前提条件,有文献表明,弱精子症患者的精液中线粒体功能被破坏的精子的比例较正常人高；有学者通过用H202与精子孵育,人工诱导氧化应激,可以降低精子活力和MMP,降低精子线粒体ATP的产生,表明过度的氧化应激对线粒体功能或MMP是有害的。另有学者表明,精子中ATP的含量越多,其精子活力也越高。Ferramosca研究表明,高水平的ROS可以解耦连线粒体的氧化磷酸化和ATP的合成,这也许是高水平ROS可以降低精子活力的一个原因。他莫昔芬(tamoxifen, TAM)是选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulators, SERMs)的一种,目前在泌尿外科和男科中常被作为一种经验性治疗药物用于治疗特发性男性不育症。目前已知TAM治疗特发性男性不育症的药理机制是：一,他莫昔芬具有抗雌激素作用,可抑制下丘脑、垂体的雌激素受体,阻止正常的“反馈性抑制”,促使促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone, GnRH)和卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone, FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone, L H)从垂体释放出来,从而促进精子生成；二,TAM可增加Leydig细胞对LH的敏感性,促进Leydig细胞产生睾酮(testosterone, T),再作用于生精细胞,促进生精细胞产生精子；三,TAM可干预外源性雌激素对男性患者的毒副作用,研究证明不育症患者较正常男性.精液中有更高的外源性雌激素。有文献表明,服用TAM治疗后,可以使精子浓度升高,但是对精子活力和精子形态并无改善作用,但有荟萃分析表明,TAM治疗可以提高精子活力。关于TAM是否能够改善精子活力,目前还未能得到医学界的一致肯定。然而目前已有一些文献表明,TAM具有一定的抗氧化作用,所以我们猜想TAM可以通过抗氧化作用改善线粒体功能,从而为精子运动提供更多的能量。Barkay等发现,非甾体抗炎药可以提高精浆中卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone, FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone, LH)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)的水平,这有助于生精小管上皮的发育,可以提高精子浓度和活力；1995年,有研究表明,吲哚美辛治疗特发性不育症,可以显著改善精子活力,这可能是由于它阻碍前列腺素的对生精功能的毒副作用,同时它提高精液中cAMP水平,这反过来可以改善精子活力和生育能力。考虑到吲哚美辛不具有抗氧化性,并且过往常常被男科医生将它作为经验性药物用于治疗特发性不育症,本研究将吲哚美辛用作临床对照组的治疗药物。考虑到伦理因素和给患者提高有效治疗的义务,我们没有使用安慰剂作为对照。目的1.探索他莫昔芬治疗少弱精子症患者过程中对精子质量,特别是精子活力的影响。2.探索他莫昔芬在治疗少弱精子症患者过程中对患者血清及精液氧化应激指标的影响。3.探索他莫昔芬在治疗少弱精子症患者过程中对精子线粒体功能的影响。方法研究对象为2014年4月——2015年1月就诊于我院生殖医学中心门诊的120例少弱精子症患者,本实验采用前瞻性、随机、临床对照、试验性研究,120例少弱精子症患者随机分为实验组,口服TAM治疗3个月(lOmg, bid);和临床对照组,口服吲哚美辛治疗3个月(25mg, bid)。观察TAM治疗特发性少弱精子症的临床疗效,用分光光度比色法在治疗前后检测血清及精浆中丙二醛(malondialdehyde, MDA)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity, TAC)、线粒体琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase, SDH)的变化；采用生物荧光发光法检测在治疗前后检测精子ATP含量的变化；采用流式细胞技术在治疗前后检测精子MMP和精子细胞内ROS水平的变化。结果1.一般情况在治疗期间,14个患者因为各自不同的原因退出了实验,5个患者要求转为IVF治疗,5个患者失访。剩余96个患者完成了3个月的随访,并纳入进行实验分析,其中41名为服用吲哚美辛的临床对照组,55名为服用TAM的实验组；就诊于我院生殖中心门诊的男性不育患者,年龄20--40岁,不育病史在1-10年,临床对照组年龄(28.41±4.62)岁,病程(4.79±1.95)年,研究组年龄(27.88-3.38)岁,病程(4.65±2.10)年,2组一般资料相比无统计学意义(P0.05),具有可比性。2.用药前后精液参数的变化用药前,临床对照组、研究组之间在精液参数方面无显著性差异(P0.05)。用药治疗3个月后,临床对照组前向活率从(21.53±5.20)%升高到(24.78±5.86)%,P0.05,精子总活率从(31.48±8.31)%升高到(36.78±10.47)%,P0.05；研究组精精子总数从(29.68±9.13)×106 spz升高到(41.27±8.33)×106spz, P0.001,精子浓度从(10.34±2.13)×106 spz/ml升高到(14.67+3.92)×106spz/ml,,P0.001,前向活率从(19.17±7.17)%升高到(24.73±6.53)%,,P0.001,精子总活率从(30.67±7.53)%升高到(35.72±10.20)%,P0.01。两组间比较,用药后,研究组精子总数和精子浓度与临床对照组差异有统计学意义(41,27±8.33)×106 spz vs. (32.90±8.48)×106 spz, P0.001; (14.67±3.92)×106 spz/ml vs.(10.76±3.07)×106 spz/ml,P0.001]。3.用药前后血清及精液中氧化应激指标的变化用药前,临床对照组、试验组之间血清和精浆MDA、血清和精浆TAC及精子ROS无显著性差异(P0.05)。用药后,临床对照组的血清MDA和精浆MDA、血清TAC和精浆TAC及精子ROS无显著性变化(P0.05)；研究组血清TAC和精浆TAC较用用药前有明显提高[(8.14±3.01)×U/ml vs. (12.31±2.89)×U/ml,P0.001; (11.74±3.57)×U/ml vs. (15.47±3.88)×U/ml, P0.001],精子ROS含量明显下降[(3.27±1.08)% vs.(2.27±0.95)%,P0.001]；两组间比较,用药后,研究组血清TAC和精浆TAC较临床对照组提高明显[(12.31±2.89×U/ml vs. (8.75±2.63)×U/ml, P0.001; (15.39±4.21)×U/ml vs.(12.12±4.07)×U/ml,P0.05],精子ROS含量较临床对照组下降明显[(2.27±20.95)%vs.(2.85±0.96)%,P0.05]。4用药前后精子线粒体SDH活性的变化用药前,临床对照组、试验组之间精子线粒体SDH活性无显著性差异(P0.05)。用药后,临床对照组精子线粒体SDH活性无明显改善(P0.05),研究组精子线粒体SDH活性有明显升高[(5.92±1.51)×U/106 spz vs. (6.66±1.61)×U/106 spz,P0.05]。两组间对比,用药后,研究组较对照组有明显升高[(6.66±1.61)×U/106 spz vs.(5.70±1.49)xU/106 spz,P0.05]。5.用药前后精子ATP含量的变化用药前,临床对照组、试验组之间精子ATP含量无显著性差异(P0.05)。用药后,临床对照组精子ATP含量有明显改善[(68.37±12.02)×pmol/106 spz vs. (77.81±14.08)×pmol/106 spz, P0.001],研究组精子ATP有明显改善[(69.37±14.78)×pmol/106 spz vs. (81.44±11.77)xpmol/106 spz,P0.001];两组间比较,用药后,精子ATP含量差异无统计学意义(P0.05)。6.用药前后精子MMP的变化流式细胞技术结果显示,用药前,临床对照组、试验组之间精子MMP无显著性差异(P0.05)。用药后,临床对照组精子MMP有明显改善[(34.84±5.60)%vs.(40.88±8.34)%,P0.001],研究组精子MMP有明显改善[(36.00±6.17)%vs.(42.53±5.99)%,P0.001]；两组间比较,用药后,精子MMP差异无统计学意义(P0.05)。结论TAM不仅可以通过内分泌相关机制提高精子浓度,而且还可以通过抗氧化作用改善精子线粒体的功能,使线粒体ATP生成增加,进而提高精子活力。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R698.2

【共引文献】