前列腺ICC介导交感神经信号调控平滑肌活动的功能初探

发布时间：2019-02-22 08:31

【摘要】：第一部分豚鼠前列腺ICC介导交感神经信号的形态学研究实验1：前列腺ICC与神经和平滑肌的超微形态学联系目的：观察前列腺ICC超微结构特点以及与前列腺神经、平滑肌细胞之间的超微结构联系。方法：制作豚鼠前列腺超薄组织切片,透射电镜下依据超微结构特点辨识ICC并观察其与神经、平滑肌细胞之间的超微结构联系。结果：豚鼠前列腺组织内存在符合典型ICC超微结构鉴定标准的间质细胞,这些前列腺ICC分布于腺上皮和平滑肌组织之间的间质中以及平滑肌细胞之间,与相邻的神经末梢形成突触样连接,同一ICC可以通过突触样连接和多个的神经末梢相邻。ICC和周围的平滑肌细胞密切接触,之间存在缝隙连接和直接接触等连接形式。结论：豚鼠前列腺ICC具有介导前列腺神经信号,调控平滑肌活动的超微形态学基础。第一部分豚鼠前列腺I CC介导交感神经信号的形态学研究实验2：前列腺ICC与交感神经和平滑肌的组织形态学联系目的：观察前列腺ICC和交感神经以及平滑肌细胞之间的组织形态学联系。方法：制作豚鼠前列腺组织冰冻切片并进行免疫荧光染色。使用c-Kit抗体标记ICC,TH和DβH抗体标记交感神经纤维,a-actin抗体标记平滑肌细胞,分别采用c-Kit和TH抗体,c-Kit和DβH抗体,c-Kit和a-actin抗体组合进行免疫荧光双染色标记实验。结果：前列腺ICC分布于TH、DβH阳性的交感神经周围,多沿交感神经纤维平行分布并和神经纤维形成密切、广泛的接触。ICC的胞体和细胞突起紧贴相邻的平滑肌细胞形成密切的接触联系。前列腺ICC自身表达交感神经标记物TH和DβH。结论：豚鼠前列腺ICC具有介导前列腺交感神经信号,调控平滑肌活动的组织形态学基础以及自身合成儿茶酚胺的潜能。第二部分豚鼠前列腺ICC介导交感神经信号的功能学研究实验1：α1受体和Cx43等功能蛋白在前列腺ICC上的表达目的：观察α1肾上腺素受体和缝隙连接Cx43等功能蛋白在前列腺ICC上的表达。方法：制作豚鼠前列腺组织冰冻切片,分离、培养前列腺ICC并进行免疫荧光染色。分别采用c-Kit和α1受体抗体,c-Kit和Cx43抗体组合进行免疫荧光双染色标记实验。结果：前列腺组织内ICC上存在α1受体和Cx43等功能蛋白的表达,其中ICC上α1受体的表达明显强于周围的平滑肌。分离、培养的前列腺ICC上同样表达α1受体和Cx43。结论：前列腺ICC为交感神经的靶细胞,并可能借助细胞膜上的Cx43与周围平滑肌细胞形成信息传递的通道。第二部分豚鼠前列腺ICC介导交感神经信号的功能学研究实验2：交感神经递质NE对前列腺ICC兴奋性的影响目的：观察前列腺ICC对交感神经递质NE的反应性。方法：体外分离、培养、鉴定前列腺ICC,采用全细胞膜片钳技术记录NE诱发ICC产生的电流,并进一步观察使用α受体阻滞剂酚妥拉明和a1受体阻滞剂哌唑嗪前后ICC细胞电流的变化。结果：在前列腺ICC上没有记录到自发的内向电流(n=6),当电压钳制在-60mV时NE可以诱发前列腺ICC产生显著的内向电流(n=6).1μmolNE、10μmol NE、100μmolNE诱发的内向电流为-106±29pA、-210±68pA和-368±113pA。诱发的内向电流幅度和NE具有一定的量效关系(P0.01)。在使用a受体阻滞剂酚妥拉明和α1受体阻滞剂哌唑嗪后,NE未诱发ICC产生明显的内向电流。结论：前列腺ICC为前列腺交感神经信号的功能性靶细胞,α1受体为ICC介导交感神经信号的功能学基础。第二部分豚鼠前列腺I CC介导交感神经信号的功能学研究实验3：前列腺I CC在交感神经递质诱发平滑肌活动中的作用目的：探索前列腺ICC在交感神经递质诱发平滑肌活动中的作用。方法：制作前列腺平滑肌肌条,将肌条固定于灌流槽中,记录NE诱发的前列腺肌条收缩幅度和频率,以及加入Glivec后收缩幅度和频率的变化。结果：在体外NE(50μmol/L)可以诱发前列腺肌条产生明显的收缩活动,收缩幅度为0.98±0.16g,收缩频率为2.54±0.28次/分。使用Glivec后肌条收缩幅度显著下降,50μmol/L组为0.56±0.07g(P0.01),200μ mol/L组为0.25±0.05g(P0.01)；收缩频率50μ mol/L组为2.67±0.32次／分(P0.05),200μ mol/L组为2.75±0.31次／分(P0.05),较Glivec使用前无显著变化。结论：ICC可能参与了前列腺内交感神经信号的传递以及平滑肌的活动的调控。
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【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R697.3

【参考文献】