【摘要】：目的糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(Diabetes mellitus,DM)最主要的微血管并发症之一。目前关于DN机制的研究涉及诸多方面,其中肾小球屏障功能的损害是导致蛋白尿的直接原因,而肾小球内皮细胞则是肾小球滤过膜的重要组成部分。本研究选用高糖高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)尾静脉注射建立T2DM和DN大鼠模型为研究对象,予雷公藤多苷(TWP)联合小檗碱(BBR)分别于正常白蛋白尿期和微量白蛋白尿期进行干预,探讨其对肾小球内皮细胞相关因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的影响。方法清洁级雄性SD大鼠260只,随机选取20只分别作为预防组正常对照组(PNC组,n=10)、治疗组正常对照组(TNC组,n=10),以常规饲料喂养。其余240只大鼠以高糖高脂饲料喂养,8周后予STZ(30mg/kg)尾静脉注射建立T2DM模型。将成模大鼠随机分为预防(P)组和治疗(T)组,各120只大鼠。预防组分为模型对照(PDM)组、雷公藤多苷单药组、小檗碱单药(PB,BBR 150mg/kg·d)组和雷公藤多苷联合小檗碱组。其中雷公藤多苷单药组根据应用雷公藤多苷的剂量进一步分为低(TWP1mg/kg·d)、中(TWP3mg/kg·d)、高(TWP6mg/kg·d)剂量(PTL、PTM、PTH)组;雷公藤多苷联合小檗碱组根据应用雷公藤多苷的剂量进一步分为低剂量雷公藤多苷联合小檗碱(PTBL,TWP1mg/kg·d+BBR150mg/kg·d)组、中剂量雷公藤多苷联合小檗碱(PTBM,TWP3mg/kg·d+BBR150mg/kg·d)组、高剂量雷公藤多苷联合小檗碱(PTBH,TWP6mg/kg·d+BBR150mg/kg·d)组,每组各15只,成模后即开始灌胃,正常对照(PNC)组和模型对照(PDM)组以等量蒸馏水(2ml)灌胃,灌胃8周末处死取材。治疗组分为模型对照(TDM)组、雷公藤多苷单药组、小檗碱单药(TB,BBR 150mg/kg·d)组,雷公藤多苷联合小檗碱组。其中雷公藤多苷单药组根据应用雷公藤多苷的剂量进一步分为低(TWP 3mg/kg·d)、中(TWP 6mg/kg·d)、高(TWP 9mg/kg·d)剂量(TTL、TTM、TTH)组;雷公藤多苷联合小檗碱组根据应用雷公藤多苷的剂量进一步分为低剂量雷公藤多苷联合小檗碱(TTBL,TWP3mg/kg·d+BBR150mg/kg·d)组、中剂量雷公藤多苷联合小檗碱(TTBM,TWP6mg/kg·d+BBR150mg/kg·d)组、高剂量雷公藤多苷联合小檗碱(TTBH,TWP 9mg/kg·d+ BBR 150mg/kg·d)组,每组各15只,成模6周后开始灌胃,正常对照(TNC)组和模型对照(TDM)组以等量蒸馏水(2ml)灌胃,灌胃8周末处死取材。实验过程中记录大鼠体重(BW)、血糖、24小时尿微量白蛋白(UMA)变化;处死取材时记录BW、肾重(KW);留取血标本检测血糖、肝肾功能、血脂、血常规;采用ELISA法检测大鼠血清中MCP-1、VCAM-1水平;留取肾组织标本,电镜观察大鼠肾组织肾小球滤过膜超微结构改变,分别应用RT-PCR法、Western Blotting法和免疫组化法检测大鼠肾组织中MCP-1和VCAM-1的mRNA和蛋白的表达。结果1.高糖高脂饲料喂养8周后大鼠血脂、胰岛素水平和HOMA-IR、HOMA-β指数较常规饲料组明显升高(P0.05);STZ注射后,高糖高脂饲料喂养大鼠血糖明显升高,体重明显减轻,同时伴有多饮、多尿、多食等症状,成模6周后实验大鼠24h尿微量白蛋白明显升高。2.一般指标:①体重、血糖:与PNC、TNC组相比,预防和治疗各组大鼠造模后血糖明显升高(P0.05),体重明显下降(P0.05),雷公藤多苷和小檗碱灌胃对大鼠体重、血糖未见显著影响(P0.05);②肾重指数(KW/BW):与PNC、TNC组相比,PDM和TDM组大鼠KW/BW均明显升高(P0.05),预防组大鼠经雷公藤多苷和小檗碱灌胃后KW/BW均有所下降(P0.05),以PTH组下降最为明显;治疗组大鼠经雷公藤多苷和小檗碱灌胃后,TTH组、TB组及雷公藤多苷联合小檗碱各组(TTBL、TTBM、TTBH)大鼠KW/BW下降有统计学差异(P0.05);③血脂:与PNC、TNC组相比,糖尿病各组大鼠甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平显著升高(P0.05),雷公藤多苷和小檗碱灌胃后未见显著影响(P0.05):④肝、肾功能、血常规:大鼠肝、肾功能和血常规在各组间均无明显差异(P0.05),雷公藤多苷和小檗碱灌胃后未见显著影响(P0.05)。3.24h尿微量白蛋白(UMA):①预防组:与PNC组相比,糖尿病各组大鼠UMA水平明显升高(P0.05);与PDM组相比,雷公藤多苷单药各组、小檗碱单药组和雷公藤多苷联合小檗碱各组大鼠UMA水平明显降低(P0.05),且呈剂量依赖性;②治疗组:与TNC组相比,糖尿病各组大鼠UMA水平明显升高(P0.05);与TDM组相比,雷公藤多苷单药各组和雷公藤多苷联合小檗碱各组大鼠UMA水平明显降低(P0.05),呈剂量依赖性。4.电镜观察肾小球滤过膜变化:正常对照组大鼠肾小球内皮细胞数量、形态、毛细血管腔的大小和内容物未见明显异常。糖尿病各组大鼠可见肾小球内皮细胞增生肿胀呈拥塞状,向管腔内突出等早期DN肾小球内皮细胞超微结构改变,治疗组较预防组相比更为严重。雷公藤多苷单药各组、小檗碱组和雷公藤多苷联合小檗碱各组上述病理性超微结构均有所改善。5.采用ELISA法检测大鼠血清中MCP-1、VCAM-1水平:①预防组:与PNC组相比,糖尿病各组大鼠血清MCP-1、VCAM-1水平明显升高(P0.05);与PDM组相比,PTH、PTBM和PTBH组大鼠血清MCP-1、VCAM-1水平显著下降(P0.05);②治疗组:与TNC组相比,糖尿病各组大鼠血清MCP-1、VCAM-1水平明显升高(P0.05);与TDM组相比,大鼠血清MCP-1水平以TTH、TTBL、TTBM和TTBH组下降明显(P0.05),而大鼠血清VCAM-1水平在TTM、TTH、TTBL、TTBM和TTBH组显著下降(P0.05)。6.应用RT-PCR法检测大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1mRNA的表达:①预防组:与PNC组相比,糖尿病各组大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1mRNA表达明显升高(P0.05);与PDM组相比,雷公藤多苷单药各组、小檗碱单药组和雷公藤多苷联合小檗碱各组大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1mRNA表达明显降低(P0.05),且呈剂量依赖性;②治疗组:与TNC组相比,糖尿病各组大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1mRNA表达明显升高(P0.05);与TDM组相比,雷公藤多苷单药各组和雷公藤多苷联合小檗碱各组大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1mRNA表达明显降低(P0.05),呈剂量依赖性。7.应用WesternBlotting法检测大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1蛋白的表达:①预防组:与PNC组相比,糖尿病各组大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1蛋白表达明显升高(P0.05);与PDM组相比,雷公藤多苷单药各组、小檗碱单药组和雷公藤多苷联合小檗碱各组大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1蛋白表达明显降低(P0.05),且呈剂量依赖性;②治疗组:与TNC组相比,糖尿病各组大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1蛋白表达明显升高(P0.05);与TDM组相比,雷公藤多苷单药各组和雷公藤多苷联合小檗碱各组大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1蛋白表达明显降低(P0.05),呈剂量依赖性。8.应用免疫组化法检测大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1蛋白的表达:与PNC、TNC组相比,糖尿病各组大鼠肾小球中均可见标记的MCP-1、VCAM-1细胞浸润(P0.05);雷公藤多苷灌胃后大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1表达明显降低(P0.05),中、高剂量雷公藤多苷(PTM、PTH、TTM、TTH)组下降明显;应用小檗碱灌胃后,在预防组观察到小檗碱作用明显(P0.05),而在治疗组单纯小檗碱灌胃效果不明显(P0.05):雷公藤多苷联合小檗碱各组大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1表达明显降低(P0.05),中、高剂量雷公藤多苷联合小檗碱(PTBM、PTBH、TTBM和TTBH)组效果显著。结论1.通过高糖高脂饮食联合小剂量STZ,成功制备T2DM和DN模型。2.电镜结果显示DN大鼠肾小球内皮细胞超微结构改变,同时大鼠肾组织中MCP-1、VCAM-1的mRNA水平和蛋白的表达明显升高,提示肾小球内皮细胞相关细胞因子和黏附分子的改变与DN发生发展具有相关性。3.雷公藤多苷单药、小檗碱单药或二者联合应用可降低预防组大鼠尿蛋白水平,延缓DN发生,雷公藤多苷单药或联合小檗碱干预可降低治疗组大鼠尿蛋白水平,减慢DN发展,而单独应用小檗碱对治疗组大鼠效果不明显。且实验大鼠应用各剂量雷公藤多苷及小檗碱灌胃后均未观察到明显的肝肾损害和外周血细胞减少,安全性良好。4.应用雷公藤多苷和小檗碱干预可减少以MCP-1、VCAM-1为代表的肾小球内皮细胞相关的细胞因子和黏附分子的表达,减轻内皮细胞炎症反应,修复滤过膜结构,延缓DN发生,减慢DN发展。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R587.2;R692.9
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 苏维广,孟江;雷公藤的临床应用[J];辽宁中医杂志;2003年10期
2 李中华,张振家,孙卫红;雷公藤的临床应用[J];医药导报;2003年S1期
3 陈成威 ,何悦仪;雷公藤多苷治疗小儿乙型肝炎病毒相关肾炎12例疗效观察[J];新医学;2005年05期
4 毛庆秋,黄真;雷公藤多苷的临床应用进展[J];时珍国医国药;2005年05期
5 景晓平;丁樱;任献青;李向峰;;雷公藤多苷对小儿生殖安全性评价研究的思考[J];时珍国医国药;2009年01期
6 林燕;窦一田;杨洪涛;;雷公藤多苷治疗原发性肾病综合征的回顾性研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年10期
7 张金梅;;雷公藤几种疗效的临床分析[J];内蒙古中医药;2012年14期
8 张俊贞;;雷公藤多苷治疗儿童紫癜性肾炎的研究进展[J];中国药房;2012年48期
9 唐贞力;雷公藤临床应用新进展[J];中医药研究;1998年06期
10 吕必华,张玲,蒋巧俐;雷公藤多苷的药理研究与临床应用[J];中国医院药学杂志;2001年07期
相关会议论文 前10条
1 龚宁波;张丽娟;;雷公藤多苷的临床用途概述[A];第四次全国雷公藤学术会议论文汇编[C];2004年
2 于艳秋;张海鹏;杜烨玮;段忠辉;;雷公藤多苷对急性移植物抗宿主病的作用及其机制的研究[A];第四次全国雷公藤学术会议论文汇编[C];2004年
3 丁樱;崔瑞琴;;雷公藤多苷对雌性幼鼠生育力的影响[A];2008年全国中西医结合肾脏病南京论坛论文汇编[C];2008年
4 吴念祖;;雷公藤在眼科的应用[A];第五届全国雷公藤学术会议论文汇编[C];2008年
5 李波;;雷公藤的临床应用及毒性作用[A];第五届全国雷公藤学术会议论文汇编[C];2008年
6 刘继勇;杨帝顺;尤本明;王峥涛;陈凯先;;雷公藤多苷纳米凝胶的构建及体内药代动力学研究[A];2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周论文集[C];2013年
7 任献青;丁樱;崔瑞琴;;菟丝子黄酮干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠睾丸组织损伤的实验研究[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年
8 林宗明;杨春欣;张永康;王国民;许迅辉;吕迁洲;任豫申;董颖;;去甲泽拉木醛与雷公藤多苷免疫抑制比较研究[A];第四次全国雷公藤学术会议论文汇编[C];2004年
9 丁樱;崔瑞琴;;雷公藤多苷对雌性幼鼠雌激素及其受体表达的影响[A];药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集（上）[C];2008年
10 刘继勇;杨帝顺;尤本明;朱全刚;胡晋红;王峥涛;;雷公藤多苷纳米乳的制备及体外透皮特性研究[A];第四届全国药学服务与研究学术论坛论文集[C];2011年
相关重要报纸文章 前3条
1 董兴刚；安增梅;雷公藤治疗蛋白尿廿年[N];中国医药报;2004年
2 曲政海;小剂量雷公藤多苷可治疗Still病[N];中国医药报;2004年
3 莫惠平 潘秋荣 谭柳群;雷公藤多苷的不良反应及防治[N];中国医药报;2003年
相关博士学位论文 前10条
1 陆柳如;基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾活血法修复雷公藤多苷致卵泡发育障碍的分子机制[D];成都中医药大学;2016年
2 高丽;中药复方含药血清对雷公藤致骨髓细胞凋亡的保护作用及其机制研究[D];湖北中医药大学;2011年
3 李大可;解毒饮防治雷公藤所致药物性肝损害作用机制的实验研究[D];山东中医药大学;2008年
4 倪张俊;雷公藤致大鼠药源性卵巢功能耗损模型建构与补肾法干预研究[D];广州中医药大学;2013年
5 杨学文;雷公藤多苷治疗RA的抗血管生成作用及机理研究[D];南京中医药大学;2010年
6 曹俊岩;雷公藤多苷致大鼠卵泡发育障碍模型的中医证候属性研究[D];成都中医药大学;2011年
7 王妍;雷公藤与甲氨蝶呤、黄芪与当归联用治疗RA机制的生物信息学分析[D];中国中医科学院;2012年
8 任献青;补肾中药及提取物干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠生殖损伤的实验研究[D];北京中医药大学;2008年
9 付雨;雷公藤多苷致大鼠卵巢功能低下模型的病理机制与中医证候属性研究[D];成都中医药大学;2010年
10 柴智;逍遥散对雷公藤致大鼠肝毒性的保护作用及其机制研究[D];湖北中医药大学;2012年
相关硕士学位论文 前10条
1 张贺;新风胶囊中雷公藤配伍减毒作用研究[D];安徽中医药大学;2015年
2 翟金晓;雷公藤、夹竹桃及常见有毒生物碱的中毒、检测及评价研究[D];苏州大学;2015年
3 陈秋杰;雷公藤对ITP患者T细胞亚群IDO与TTS表达的影响[D];广州中医药大学;2015年
4 赵阳春;探讨曲普瑞林、六子方对雷公藤多苷致卵巢功能受损的保护机制[D];浙江中医药大学;2015年
5 赵瑞萍;甘露糖结合凝集素及炎症因子在糖尿病模型大鼠肾组织的表达及雷公藤多苷对其干预研究[D];蚌埠医学院;2015年
6 王石秀;雷公藤多苷壳聚糖微球的制备及其对小鼠实验性结肠炎作用的研究[D];南昌大学医学院;2015年
7 廉信;雷公藤多苷对特应性皮炎患者细胞因子表达影响的研究[D];天津医科大学;2008年
8 李冠炜;雷公藤多苷上调克罗恩病病人局部肠粘膜Treg细胞及调节炎症因子的分泌[D];南京大学;2014年
9 刘伙亮;雷公藤治疗特发性膜性肾病的系统评价[D];广州中医药大学;2016年
10 夏莎;雷公藤多苷及其与白芍总苷配伍对成骨细胞MC3T3-E1增殖、周期、凋亡及相关蛋白表达的影响[D];南京中医药大学;2016年
，
本文编号：
2453739
