【摘要】：目的:观察上调细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)表达对IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者血清IgA1刺激人肾小球系膜细胞(human mesangial cell,HMC)增殖的影响,探讨其可能的机制,从而揭示SOCS3在IgAN肾脏损害中的作用。方法:1)采用Jacalin亲和层析联合SephacrylS-200凝胶过滤法纯化聚合IgAN患者血清IgA1(aIgA1)。2)以HMC为研究对象,通过腺病毒转染技术建立高表达SOCS3的HMC,再以aIgA1刺激HMC。3)确定aIgA1作用时间和浓度及病毒转染条件后,设立4个实验组:a)空白对照组:HMC仅加入10%FBS和1%双抗的1640培养基正常培养,定时换液;b)IgA1组:HMC正常培养后加入aIgA1刺激;c)IgA1+空载腺病毒组:HMC正常培养转染空载腺病毒48小时后加入aIgA1刺激;d)IgA1+SOCS3过表达腺病毒组:HMC正常培养转染SOCS3腺病毒48小时后加入aIgA1刺激;4)采用MTT法检测系膜细胞增殖,Western blot和Real-time PCR检测各组SOCS3、Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)蛋白和mRNA表达情况。5)实验数据采用均数±标准差(sx±)表示,通过统计软件IBM SPSS Statistics 20进行t检验,结果以p0.05为有显著性差异。结果:1)aIgA1刺激HMC12h、24h和48h,刺激24h开始表现出明显的促增殖作用,浓度为0.25、0.5、1.0mg/ml与空白对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);浓度为1.5mg/ml与空白对照组比较,差异无统计学意义。其中浓度为0.5mg/ml作用48h时aIgA1的促增殖作用最为明显。aIgA1刺激后与空白对照组相比,SOCS3、TLR4、TGF-β1蛋白和mRNA表达均有显著升高(p0.05),差异有统计学意义。2)分别转染SOCS3过表达腺病毒和空载腺病毒48h后,对HMC加入aIgA1进行干预,过表达SOCS3的HMC经aIgA1刺激24h或48h,与IgA1组和IgA1+空载腺病毒组相比,MTT检测发现细胞的增殖程度明显降低,差异有统计学意义(P0.05),SOCS3对IgA1刺激系膜细胞的增殖反应有一定的抑制作用。提取各组细胞总蛋白和总RNA检测相关蛋白和mRNA表达变化,IgA1+SOCS3过表达病毒组较IgA1+空载腺病毒组及IgA1组SOCS3蛋白和mRNA表达明显升高;IgA1+SOCS3过表达病毒组与IgA1+空载腺病毒组、IgA1组相比,TLR4、TGF-β1蛋白和mRNA表达有显著降低,差异有统计学意义(p0.05)。结论:1)IgAN患者aIgA1可促进HMC增殖,且增殖率与aIgA1有一定的时间剂量关系。2)SOCS3、TLR4、TGF-β1在正常HMC中表达较低,IgAN患者a IgA1刺激可增加SOCS3、TLR4、TGF-β1在HMC中的表达。3)腺病毒转染技术可以显著上调SOCS3的表达,上调SOCS3表达后可抑制aIgA1刺激诱导的系膜细胞增殖,并下调TLR4和TGF-β1的表达,从而发挥对肾脏的保护作用。
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【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692.31
【参考文献】
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