miR-145对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡及其调控基因表达的影响

发布时间：2019-08-08 07:14

【摘要】：目的：研究miR-145对前列腺癌PC-3细胞系增殖和凋亡及其调控基因表达的影响。 方法：常规培养前列腺癌PC-3细胞株，实验分为3组：不做任何处理的PC-3细胞为空白对照组，仅转染不表达miR-145的空白病毒载体为阴性对照组，转染有表达miR-145的慢病毒载体为mir-145转染组。感染后72h，荧光显微镜下观察细胞，判断细胞的感染效率，荧光定量PCR检测miRNA-145的表达情况，用MTT法检测前列腺癌PC-3细胞的增殖能力，应用流式细胞仪检测细胞凋亡，，RT-PCR检测预测的miR-145调控基因（C-MYC， IRS1，IGF1R，CDKN1A，CCNA2）的表达变化。 结果：72小时后荧光显微镜下观察细胞转染效率达80%。荧光定量PCR结果显示：miR-145转染组的miR-145表达水平较阴性对照组、空白对照组明显上调（p0.05）。MTT结果显示，miR-145转染组的细胞增殖活性明显低于空载体组和空白对照组。流式细胞仪检测显示，过表达miR-145后，PC-3细胞的细胞凋亡率增高。RT-PCR结果显示miR-145转染组IRS1mRNA表达明显降低（P＜0.05）。 结论： miR-145可以抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖，诱导细胞凋亡。前列腺癌PC-3细胞中miR-145表达可使IRS1基因表达降低。
【图文】：

前列腺癌PC-3 转染miR-145慢病毒载体72 h 后倒置荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白的表达，显示转染效率大于80%，MOI=20。继续培养1周后用于后续实验（见图1-1）。图1-1 细胞转染慢病毒72h 后，转染效率＞80% （40×）2.2 PC-3 细胞转染慢病毒后 miR-145 的含量变化转染过表达miR-145慢病毒载体后,miR-145转染组PC-3细胞中的miR-145表达水平相比空白对照组及阴性对照组明显增加，与阴性对照组比较，表达量增加538倍（图1-2）。

图1-3 PC-3细胞转染miR-145后 MTT检测细胞的增殖活性变化2.4 流式细胞仪检测 miR-145 对 PC-3 细胞凋亡的影响流式细胞仪（图1-4）图中四象限分别代表：左上象限：坏死细胞；右上象限：晚期凋亡细胞；左下象限：活细胞；右下象限：早期凋亡细胞。计算三组细胞凋亡率。三组细胞凋亡率：miR-145转染组（13.26±1.62）%，阴性对照组：（3.78±3.12）%，空白对照组：（3.24±2.14）%，结果显示：转染组与阴性对照及空白对照组相比较，凋亡率显著增加(P<0.05)。blank control miR-145图1-4 流式细胞仪测三组细胞凋亡率的变化
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.25

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本文编号：2524218