囊性纤维化转运调节因子氯离子通道功能障碍影响小鼠睾丸支持细胞细胞骨架

发布时间：2019-08-24 10:25

【摘要】：目的:探究囊性纤维化转运调节因子(CFTR)氯离子通道功能障碍是否影响小鼠睾丸支持细胞骨架。方法:培养TM4小鼠睾丸支持细胞系,用1、5、10、20μmol/L的CFTR氯离子通道特异阻断剂CFTRinh-172分别干预细胞48 h。CCK-8试剂盒检测细胞毒性,细胞免疫荧光法检测TM4细胞骨架蛋白F-actin和Ac-tub的表达。实时荧光定量PCR(q PCR)检测细胞间连接相关蛋白N-钙粘蛋白、波形蛋白、粘着斑蛋白的表达。结果:20μmol/L浓度的CFTRinh-172对支持细胞有毒性。用不同浓度的CFTRinh-172处理TM4细胞48、72 h时,与细胞骨架密切相关的F-actin和Ac-tub的表达随着CFTRinh-172浓度增加而减少(P0.05)。q PCR实验结果显示不同浓度CFTRinh-172对支持细胞N-钙粘蛋白、波形蛋白和粘着斑蛋白mRNA表达没有显著影响。结论:CFTR氯离子通道对维持正常睾丸支持细胞骨架有着重要作用。CFTR氯离子通道功能的下降以及细胞骨架蛋白表达下调有可能影响睾丸支持细胞的功能,进而影响睾丸的生精功能。
【图文】：

72组、5μmol/LCFTＲinh-172组、10μmol/LCFTＲinh-172组和20μmol/LCFTＲinh-172组共5组。培养48h后用酶标仪检测各组的A值，分别为(2．06±0．07)、(1．99±0．17)、(2．03±0．11)、(1．82±0．10)、(1．28±0．24)。发现10μmol/LCFTＲinh-172组A值略有下降，但是没有统计学意义。而20μmol/LCFTＲinh-172组A值显著下降，具有统计学意义(P＜0．05)。说明当CFTＲinh-172达到20μmol/L时影响TM4细胞增殖活动，对TM4细胞有细胞毒性，故后续实验未测试20μmol/LCFTＲinh-172组。见图1。图1CCK-8法检测不同浓度CFTＲinh-172对TM4细胞生长活性的影响(n=3)与空白组相比，*:P＜0．05Figure1．EffectsofdifferentconcentrationsofCFTＲinh-172ontheviabilityoftheMT4cellsdetectedbyCCK-8assay(n=3)*:P＜0．05versustheblankgroup．2．2细胞免疫荧光检测细胞骨架蛋白F-actin和Ac-tub的表达细胞免疫荧光结果显示在加入不同浓度CFTＲinh-17248h及72h后，TM4细胞骨架都有不同程度的收缩变短、瓦解，细胞间空隙变大。特别是5μmol/L及10μmol/L浓度时，细胞骨架回缩得更明显。1、5、10μmol/LCFTＲinh-1723个浓度组的F-actin和Ac-tub荧光强度与对照组相比都有降低，，均有统计学差异。见图2～5。图2不同浓度CFTＲinh-172处理TM4细胞48h及72h后细胞骨架蛋白Ac-tub的荧光强度变化(n=3)与对照组比较，*:P＜0．05，＊＊:P＜0．01Figure2．ExpressionofAc-tubinthecytoskeletonoftheMT4cellsexposedtodifferentconcentrationsofCFTＲinh-172for48and72hours(n=3)*:P＜0．05＊＊:P＜0．01versusthecontrolgroup．图3不同浓度CFTＲinh-172处理TM4细胞48h及72h后细胞骨架蛋白F-actin

淇障侗浯蟆Ｌ?别是5μmol/L及10μmol/L浓度时，细胞骨架回缩得更明显。1、5、10μmol/LCFTＲinh-1723个浓度组的F-actin和Ac-tub荧光强度与对照组相比都有降低，均有统计学差异。见图2～5。图2不同浓度CFTＲinh-172处理TM4细胞48h及72h后细胞骨架蛋白Ac-tub的荧光强度变化(n=3)与对照组比较，*:P＜0．05，＊＊:P＜0．01Figure2．ExpressionofAc-tubinthecytoskeletonoftheMT4cellsexposedtodifferentconcentrationsofCFTＲinh-172for48and72hours(n=3)*:P＜0．05＊＊:P＜0．01versusthecontrolgroup．图3不同浓度CFTＲinh-172处理TM4细胞48h及72h后细胞骨架蛋白F-actin的荧光强度变化(n=3)与对照组比较，*:P＜0．01Figure3．ExpressionofF-actininthecytoskeletonoftheMT4cellsexposedtodifferentconcentrationsofCFTＲinh-172for48and72hours(n=3)*:P＜0．01versusthecontrolgroup．·112·中华男科学杂志2016年2月第22卷第2期NatlJAndrol，Vol．22，No．2，February2016
【作者单位】： 北京大学第三医院泌尿外科;北京大学分子医学研究所;
【基金】：北京大学985项目(2013-3-03)~~
【分类号】：R698.2

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本文编号：2528901