【摘要】：目的：肾细胞癌（Renal cell carcinoma, RCC）又称肾腺癌，是指起源于肾小管上皮细胞的恶性肿瘤，占肾脏恶性肿瘤的80%-90%，全球每年大约有20余万人被诊断为肾癌。在我国泌尿系统恶性肿瘤中，其发病率仅次于膀胱癌而居第2位。因此，探讨肾细胞癌的发病机制，特别是分子水平的研究以寻找新的治疗靶点及有效的治疗药物，具有十分重要的意义。近年来，Wnt信号通路与肿瘤关系的研究已经变成热点问题，研究发现Wnt信号通路中因子异常激活，都有可能导致细胞发生恶性化。Dickkopf-1(DKK-1)、Dickkopf-3(DKK-3)基因作为Wnt信号通路中的抑癌基因，其在肾细胞癌组织中的作用尚未明确。本课题以RCC为研究对象，应用RT-PCR技术和免疫组织化学的方法，通过研究DKK-1、DKK-3在肾细胞癌中mRNA和蛋白表达情况，试图揭示这两种抑癌基因与肾细胞癌的发生、发展、转移及预后中的作用和相互关系，从而为肾细胞癌的病因、诊断及治疗提供新的理论、实验依据和治疗新途径。 方法： 1采用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chainreaction，RT-PCR）技术分别检测经过病理证实的36例肾细胞癌组织和正常肾组织中抑癌基因DKK-1、DKK-3的mRNA表达情况。 2应用免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）PV-9000二步法分别检测经过病理证实的47例肾细胞癌组织和31例正常肾组织中DKK-1、DKK-3的蛋白表达情况。 3运用统计软件SPSS13.0对数据进行统计分析，以P0.05表示差异具有统计学意义。 结果： 1肾细胞癌组织中DKK-1、DKK-3基因的表达及其与临床病理资料之间的关系 1.1肾细胞癌组织中DKK-1、DKK-3基因mRNA表达情况 DKK-1基因mRNA在肾细胞癌和正常肾组织中的表达量分别为0.21±0.06和0.28±0.05，DKK-3基因mRNA在肾细胞癌和正常肾组织中的表达量分别为0.65±0.15和0.79±0.13，肾细胞癌组织中DKK-1、DKK-3基因的mRNA表达量明显低于正常肾组织，两者的差异具有统计学意义（P0.05）。 1.2肾细胞癌组织中DKK-1、DKK-3基因蛋白表达情况 47例肾细胞癌组织中，其中有28例DKK-1基因蛋白表达为阳性，阳性表达率为59.5%；正常肾组织31例，其中28例DKK-1基因蛋白表达为阳性，阳性表达率为90.3%，肾细胞癌组织中DKK-1蛋白阳性表达率明显低于正常肾组织（P0.05），随肾细胞癌TNM分期的升高，DKK-1阳性表达率有下降趋势。肿瘤最大径≤7.0cm组阳性表达率结果79.3%（23/29）显著高于肿瘤最大径＞7.0cm组阳性表达率44.4%(8/18)。在无区域淋巴结转移组中的阳性表达率66.8%（22/33）相比有区域淋巴结转移组的阳性表达率10.3%（1/14）显著增高，两者差异具有统计学意义（P0.05），而DKK-1在患者性别和年龄的阳性表达率无明显区别，两者差异没有统计学意义（P0.05）。 47例肾细胞癌组织中，其中31例DKK-3基因蛋白表达阳性，表达阳性率为65.9%；正常肾细胞组织31例，其中29例DKK-3基因蛋白表达阳性，表达阳性率为93.5%，肾细胞癌组织中DKK-1蛋白阳性表达率明显低于正常肾组织（P0.05），DKK-3的阳性表达率，在Ⅱ期与Ⅲ+Ⅳ期相比，差异无统计学意义（P0.05）。肿瘤最大径≤7.0cm组阳性表达率的结果72.4%（21/29）显著高于肿瘤最大径＞7.0cm组阳性表达率33.3%(6/18)，在无区域淋巴结转移组的阳性表达率60.6%（3/14）相比有区域淋巴结转移组的阳性表达率21.4%（3/14）显著增高，，两者差异具有统计学意义（P0.05），而DKK-3在患者性别和年龄的阳性表达率无明显区别，两者差异没有统计学意义（P0.05）。 2肾细胞癌中DKK-1表达与DKK-3表达之间无相关性（r=0.148，P=0.3220.01）。 结论： 1DKK-1、DKK-3的mRNA和蛋白在肾细胞癌中的表达明显的低于正常肾组织，提示DKK-1和DKK-3表达下调可能使其拮抗Wnt信号通路的功能减弱，一定程度上参与了肾细胞癌的发生，两者有可能作为判断肾细胞癌预后的指标。 2DKK-1、DKK-3表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移及肿瘤大小有关，而与患者的年龄、性别无关，无淋巴结转移组的阳性表达率明显高于有淋巴结转移组阳性表达率，肿瘤最大径≤7.0cm组阳性表达率结果显著高于肿瘤最大径＞7.0cm组阳性表达率，且DKK-1阳性表达率随TNM分期的增高有下降趋势。提示DKK-1、DKK-3在肾细胞癌组织中的低表达可能参与了肾细胞癌的发展，浸润和转移。 3DKK-1、DKK-3与肾细胞癌的临床病理特征密切相关，均呈现低表达，但二者之间可能无相关性。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.11
【参考文献】
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