RCRF在肾癌中表达的临床意义及对肾癌细胞生物学特性影响的研究

发布时间：2019-09-29 06:23

【摘要】：研究背景和目的肾细胞癌（renal cell carcinoma, RCC），又称肾癌，在所有成人恶性肿瘤中占3%左右，是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于膀胱癌。在泌尿系统恶性肿瘤中，肾癌致死率最高，5年生存率为69.4%。然而，由于缺乏适用于肾癌早期诊断的肿瘤标记物，有20%-30%的患者在诊断时已经发现远处转移，而且术前未发现转移的肾癌患者手术以后有20%-40%在随访时发现复发或远处转移。如果诊断时已经出现远处转移，5年生存率则会降低至不到10%。然而到目前为止，肾癌的转移机制仍不明确。因此，研究肾癌的转移机制，筛选能够预测肾癌复发转移的标记物显然具有重要意义。近年来，长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）逐渐成为研究的热点，已有多项研究显示lncRNA的异常调节与恶性肿瘤的发生、发展密切相关。因此，该研究的目的是找出可能与肾细胞癌复发转移相关的lncRNA，并通过一系列细胞功能实验证实其对肾癌细胞侵袭和转移的作用。研究方法 1、采用lncRNA芯片技术，根据诊断时有无远处转移，将肾透明细胞癌患者分为两组。获取两组患者的肾癌原发灶组织，筛选出在两组中表达量有明显差异的lncRNAs； 2、采用实时定量PCR技术，对筛选出来有明显差异表达的lncRNAs进行肿瘤组织与癌旁正常肾脏组织对照大样本验证，并对大样本患者临床病理资料进行统计学分析，研究其与患者的临床指标及预后的关联； 3、采用小干扰RNA（siRNA）干扰肾癌细胞系ACHN中相关lncRNA，使其表达量降低，然后通过细胞增殖试验、细胞凋亡试验、划痕试验和Transwell试验研究该lncRNA对肾癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。结果 1、在有远处转移组和无远处转移组的肾透明细胞癌组织中，，筛选出差异表达lncRNAs300余个，其中一部分lncRNAs在有远处转移组表达上调，另一部分表达下调。根据差异倍数以及错误发现率false discovery rate(FDR)，最终选定RCRF进行下一步实验。 2、根据实时定量PCR实验，发现与癌旁正常组织相比，肾癌组织中RCRF的相对含量明显增多，（p0.01）。另外，通过对80例肾癌组织及癌旁组织的检测以及分析临床病理资料，发现RCRF表达在高级别肾透明细胞癌、有淋巴转移或远处转移的肿瘤组织中表达量增多（p0.01）。 3、siRNA干扰目标lncRNA后，ACHN细胞的增殖能力下降、凋亡数量增加、迁移及侵袭能力下降。结论 1、RCRF在肾透明细胞癌肿瘤组织中明显上调，并且与肾癌病理级别和转移相关，提示其可能影响肾癌患者的预后。 2、siRNA干扰RCRF后，ACHN细胞的增殖能力下降、凋亡数量增加、迁移及侵袭能力下降，表明RCRF使肾癌细胞的生物学行为发生改变，更容易增殖、侵袭和迁移，而不易凋亡。
【图文】：

电泳图,电泳图,条带,加样

结果）RNA 质检结果8S和18S 核糖体 2条RNA条带亮且浓，在加样孔位于图片带的密度约是下面 18S 条带的两倍。见表 1-2，电泳结果表 1-2 RNA 质检数据浓度（μg/μl）总量 Total（μg） A260/A280 0.3014 6.08 2.03 0.059 1.18 1.97 0.0679 1.35 1.9 0.03817 7.63 2.05 0.4024 8.04 2.02 0.301 12.04 2.05

肾细胞癌

与癌旁正常组织相比，肾细胞癌组织中的RCRF含量明显上调((*} 【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.11

【参考文献】