长链非编码RNA PTENP1在肾透明细胞癌中的功能及分子机制研究

发布时间：2019-10-18 20:04

【摘要】：目的研究长链非编码RNA PTENP1在人肾透明细胞癌中表达及调控,并进一步探索其功能及分子机制。方法运用lncRNAs芯片技术及qTR-PCR方法初步分析lncRNAs在人肾透明细胞癌中表达谱。用qRT-PCR检测PTENP1在肾透明细胞癌中的表达情况。通过甲基化特异性PCR分析PTENP1基因甲基化状态。通过细胞增殖、迁移及侵袭实验和肿瘤异体移植实验探索PTENP1的功能。通过Western blot检测PTENP1对PTEN表达的影响,利用荧光素酶报告系统验证miR-21对PTENP1及PTEN的靶向作用。利用过表达及共表达方法,探索mir-21及PTEN在肾透明细胞癌中的功能及miR-21及PTEN对PTENP1在肾透明细胞癌中功能的影响并分析相互作用关系。结果在肾透明细胞癌组织中可以检测到大量的lncRNAs,其中数百种lncRNAs在肾癌中均存在异常表达。PTENP1在肾透明细胞癌中低表达,其基因DNA存在甲基化。PTENP1和PTEN能够抑制肾透明细胞癌增殖、迁徙及肿瘤转移。PTENP1及PTEN的表达正相关,PTENP1能够增加PTEN的表达。在肾透明细胞癌中miR-21能够靶向作用PTENP1及PTEN。MiR-21在肾透明细胞癌中具有促癌功能。在肾透明细胞癌细胞系ACHN和SN12-PM6中mir-21能够抑制PTENP1的抑癌功能。结论PTENP1在人肾透明细胞癌中低表达并与基因甲基化有关。肾透明细胞癌中PTENP1是抑癌基因,作为竞争性内源RNA (competing endogenous RNA)通过竞争miR-21影响抑癌基因PTEN的表达可能是其发挥抑癌功能的分子机制。
【图文】：

总体分布,箱型,芯片,矩形盒

图3各芯片数据的箱型图。箱型图能放映芯片数据的总体分布，图中每个矩形盒的两端边的位置分别对应数据批中表达水平处于上下四分位数的IncRNA的表达强度，矩形盒内部直线代表表达水平处于中位数的IncRNA的表达强度，从图中可初步看出各组数据的分布是类似的，这放映了样本及芯片检测过程质量良好。22

癌组织,芯片,肾透明细胞癌,透明细胞

结果与芯片结果有良好的一致性，同时提示芯片检测结果较为可信以及差异性表达的普遍性存在（图6)。在更大量的样本验证数据提示，在同样类型的不同组织样品中上述IncRNAs的表达存在一定的变异性，但是在癌与癌旁组织仍有明显的具有统计学意义的差异（图7)。同时我们也在部分组织中初步验证了部分已报道的在其他癌症中异常表的IncRNAs在肾透明细胞的表达情况（表4)。初步分析提示在其他肿瘤异常表达的IncRNAs可能为IncRNAs在肾透明细胞癌中的研究提供线索。10I ■gene chipr L / /|i// pp6 / “ T-8 J图 6 用 RT-qPCR 在六对组织中检测 IncRNA ENST00000456816，X91348，BC029135及NR—024418在癌组织中相对癌旁组织表达情况与芯片结果的比较。从图中可以看出虽然两者该的程度不一致，但上调及下调的趋势是一致的，因为检测方法的差异，这也足以说明两者结果相符，，芯片检测较为可靠。26
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.11

【参考文献】