【摘要】：目的：对超声辐照模式、超声声强、辐照时间、微泡浓度参数进行优化，确定超声联合声诺维微泡诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的最佳治疗参数，观察超声联合声诺维对DU145细胞生长的影响、探讨其机制；建立人前列腺癌DU145裸鼠皮下移植瘤模型，观察超声联合声诺维对移植瘤生长及小窝蛋白-1(caveolin-1)表达的影响。 方法：（1）用脉冲波和连续波两种不同模式的低频超声辐照DUl45细胞悬液，辐照后用荧光显微镜检测FD500染色阳性率反映细胞膜通透性改变情况；用MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 （2）应用正交设计的方法，选定超声声强、辐照时间、微泡浓度三因素，每因素设定三水平。超声声强：0.15W/cm2，0.30W/cm2和0.45W/cm2。辐照时间：10s，20s和30s。微泡浓度：10％，20％和50％。按照正交设计表进行辐照，辐照后24h用流式细胞仪检测细胞凋亡，确定最佳治疗参数。 （3）利用优化的超声治疗参数，辐照前列腺癌DU145细胞悬液。实验分为6组：对照组、声诺维组、超声组、超声联合声诺维组、甲基-β-环糊精组和胆固醇组。甲基-β-环糊精组细胞在超声辐照前24h提前向培养瓶中加入甲基-β-环糊精进行干预。胆固醇组细胞经甲基-β-环糊精干预24h后用冷磷酸盐缓冲液冲洗3次，加入RPMI-1640培养基和胆固醇继续培养24h。用MTT法绘制细胞生长曲线，流式细胞仪检测细胞凋亡，Western-blot检测小窝蛋白-1、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（磷酸化Akt）和血管内皮生长因子的表达情况。 （4）建立人前列腺癌DU145裸鼠皮下移植瘤模型，将32只荷瘤裸鼠随机分成4组：对照组、声诺维组、超声组、超声联合声诺维组。以频率80kHz，声强0.5W/cm2超声进行辐照，连续3周观察肿瘤生长情况，绘制生长曲线，用Western-blot和免疫组织化学的方法检测各组瘤组织小窝蛋白-1表达，用ELISA法检测血清小窝蛋白-1表达情况。 结果：（1）与对照组相比，两种模式的超声波处理组FD500染色阳性率均增加；与连续波模式相比，脉冲波模式FD500染色阳性率增加明显，差异有统计学意义(P0.01)。脉冲波模式轻微抑制细胞增殖，连续波能明显抑制细胞增殖(PO.05)。与对照组相比，两种模式的超声波处理组DUl45细胞凋亡率均增加；与脉冲波模式相比，连续波模式DUl45细胞凋亡率明显增加，差异有统计学意义(P0.01)。 （2）对细胞凋亡的影响因素，超声声强辐照时间微泡浓度。各因素水平影响：超声声强：0.45W/cm20.30W/cm20.15W/cm2；辐照时间：30s20s10s；微泡浓度：20％50％10％。 （3）细胞生长曲线显示，对照组和声诺维组细胞生长迅速，而超声组以及超声联合声诺维组细胞生长相对缓慢。培养48h后，与对照组相比，超声组以及超声联合声诺维组明显抑制细胞生长，以超声联合声诺维组抑制作用最明显，差别有统计学意义（P0.05）。与超声联合声诺维组相比，甲基-β-环糊精组抑制了DU145细胞的生长，细胞生长速度缓慢，而胆固醇组能部分逆转甲基-β-环糊精组抑制细胞生长的作用。流式检测结果显示，与对照组相比，超声组以及超声联合声诺维组细胞凋亡率差异有统计学意义（P0.05）。而且，与超声组相比，超声联合声诺维组细胞凋亡率差异有统计学意义（P0.05）。与超声联合声诺维组相比，甲基-β-环糊精组明显促进DU145细胞凋亡，两组间差别有统计学意义（P0.05）。而胆固醇组能部分逆转甲基-β-环糊精组促进细胞凋亡的作用。Western-blot结果显示，超声组小窝蛋白-1、磷酸化Akt和血管内皮生长因子蛋白表达轻微下调，而超声联合声诺维组小窝蛋白-1、磷酸化Akt和血管内皮生长因子蛋白表达明显减少，与对照组相比，差别均有统计学意义（P0.05）。与超声联合声诺维组相比，甲基-β-环糊精组小窝蛋白-1、磷酸化Akt和血管内皮生长因子蛋白表达均明显下调，组间差别有统计学意义（P0.05）。而胆固醇组能轻微上调甲基-β-环糊精组小窝蛋白-1、磷酸化Akt和血管内皮生长因子蛋白的表达。 （4）与对照组和声诺维组相比，超声组移植瘤体积和瘤体重量降低；与其他各组相比，超声联合声诺维组明显抑制移植瘤生长，移植瘤体积和瘤体重量降低更明显，差别均有统计学意义（PO.05）。用Western-blot和免疫组织化学法检测均显示，与对照组相比，超声组小窝蛋白-1表达明显降低，差别有统计学意义（PO.05）；超声联合声诺维组小窝蛋白-1表达降低更明显，差别有显著统计学意义（PO.01）。超声组轻微降低血清小窝蛋白浓度，与对照组相比差别无统计学意义(PO.05)；超声联合声诺维组血清小窝蛋白-1浓度明显降低，与对照组相比差别有统计学意义（PO.05），而且血清小窝蛋白-1浓度的变化与瘤体重量的变化存在一定的相关性。 结论：（1）不同辐照模式的低频超声能够影响前列腺癌DUl45细胞的生物学行为。应用于基因转染或者载药目的时，选择脉冲波模式可以增加细胞膜通透性；应用于治疗目的时，选择连续波模式可以抑制肿瘤生长。 （2）低频超声联合声诺维可诱导前列腺癌DU145细胞凋亡。使用正交设计方法确定最优超声参数组合，超声声强：0.45W/cm2，辐照时间：30s，微泡浓度：20％。 （3）低频超声联合声诺维能够抑制前列腺癌DU145细胞增殖，其机制可能与干扰了小窝蛋白-1、磷酸化Akt以及血管内皮生长因子信号通路有关。 （4）低频超声联合声诺维能够抑制前列腺癌DU145荷瘤裸鼠生长，，这种抑制作用可能与下调的小窝蛋白-1有关。
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.25;R454.3
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 王勤;王建春;李玉英;王关嵩;;甲基-β-环糊精对肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖和TGF-β/Smad信号通路的影响[J];第三军医大学学报;2011年08期
2 徐静;许川山;夏新蜀;王昕娜;王萍;向君彦;;低强度超声对小鼠肝癌H_(22)细胞抑制效应的初步研究[J];激光杂志;2009年06期
3 白文坤;张吉臻;申锷;胡兵;;正交设计法优化超声联合微泡诱导人前列腺癌细胞凋亡的研究[J];临床超声医学杂志;2012年05期
4 房良华;姜藻;;低频超声联合微泡剂对血管内皮细胞的生物学效应[J];东南大学学报(医学版);2006年05期
5 程璐;林岩;李苏宜;;重组人生长激素对裸鼠胃癌移植瘤生长及血清VEGF浓度的影响[J];东南大学学报(医学版);2010年03期
6 萧云备;谢京;张国喜;李晶;郝一昌;张晓威;刘振华;徐涛;王晓峰;;CMTM5对人前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用[J];中华男科学杂志;2012年03期
7 唐远姣;张凌燕;王磊;林玲;文晓蓉;邱逦;;治疗性超声介导微泡破裂促进大鼠体内肌肉基因转染的参数优化实验研究[J];四川大学学报(医学版);2012年06期
8 李焘;郝巧;王筱冰;刘全宏;;聚焦超声对S180肿瘤细胞膜理化性质的影响[J];生物医学工程学杂志;2009年05期
9 吕骥;任善成;孙颖浩;;前列腺癌的转化医学[J];上海医学;2012年05期
10 陈育尧;黄雪玲;;小鼠尾静脉注射法[J];毒理学杂志;2008年04期
相关博士学位论文 前1条
1 王梁;胆固醇及辛伐他汀规律前列腺癌Hedgehog激活机制研究[D];第二军医大学;2010年
本文编号：
2557268
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mjlw/2557268.html
