下调PTTG1表达对去雄培养前列腺癌LNCaP-AI细胞生长、衰老调节机制影响的初步研究

发布时间：2019-11-23 13:23

【摘要】：目的探讨下调垂体肿瘤转化基因PTTG1的表达对人去势抵抗前列腺癌LNCaP-AI细胞衰老机制的影响。方法采用体外诱导的人去势抵抗前列腺癌LNCaP-AI细胞模型,LNCaP-AI细胞转染靶向PTTG1基因的siRNA,制备下调垂体肿瘤转化基因PTTG1表达的LNCaP-AI细胞,观察并记录LNCaP-AI细胞转染成功后细胞数量曲线及细胞形态变化;采用细胞衰老-β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测下调PTTG1的稳定表达对LNCaP-AI衰老细胞数目的影响;免疫印迹法(Western blot)检测转染后LNCaP-AI细胞中细胞衰老相关蛋白Glb1、细胞周期相关蛋白(p21、p27Kip1)、异染色质调节蛋白1γ(HP1γ)、MAPK信号通路蛋白p-ERK和PI3K信号通路蛋白p-Ark、雄激素受体AR蛋白等细胞衰老相关因子的表达情况。结果(1)在转染过程中,转染组较对照组及阴性对照组,细胞生长曲线呈明显下降趋势(P0.05);(2)免疫印迹法(Western blot)检测转染组PTTG1表达较对照组及阴性对照组明显减低(P0.05);(3)细胞衰老-β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测转染组较对照组中,衰老细胞数目显著增多(P0.05);(4)转染组在10%活性炭/葡聚糖处理的胎牛血清不含酚红RPMI1640培养液中细胞数量未见明显增多,在含10%胎牛血清的培养液中生长细胞数量及对照组在上述不同培养基中细胞数量均呈对数生长(P0.05);(5)Western blot检测转染后LNCaP-AI细胞中细胞衰老相关蛋白Glb1、细胞周期相关蛋白(p21、p27Kip1)、异染色质调节蛋白1γ(HP1γ)较对照组表达明显升高(P0.05);雄激素受体AR蛋白、MAPK信号通路蛋白p-ERK和PI3K信号通路蛋白p-Ark等较对照组表达明显下降(P0.05)。结论(1)下调PTTG1基因表达促进人去势抵抗前列腺癌细胞株LNCaP-AI细胞衰老;(2)PTTG1可能通过细胞衰老和雄激素受体途径调控去势抵抗前列腺癌的进展。
【图文】：

照片,蛋白表达,转染,细胞

171：空白对照；2：阴性对照；3: siRNA-PTTG1(HSSS 190074) siRNA-PTTG1 对 PTTG1 蛋白表达影响的检测实验结果。estern blot 检测转染后各组细胞中 PTTG1 蛋白的表达印迹照片 B 为各组 PTTG1 蛋白的相对表达siRNA-PTTG1 转染 LNCaP-AI 细胞对细胞增殖和死亡的影将对照组分为空白对照及阴性对照组，于转染 72h 后分别观察下表达对细胞形态学改变及细胞增殖方面的影响。结果显示：转染aP-AI 细胞呈不规则多边形或梭形贴壁生长且细胞胞膜完整、细胞染 72h 后可见细胞胞浆内空泡较对照组明显增多，且细胞变形处理组细胞经胰酶液消化收集后经细胞计数仪对细胞总数和死细

照片,转染,细胞,细胞衰老

1：空白对照；2：阴性对照；3: siRNA-PTTG1(HSSS 190074)图 2 siRNA-PTTG1 转染 LNCaP-AI 细胞对细胞增殖和凋亡的影响A 为转染 72 小时后各组典型细胞照片 B、C 为各组细胞总数（p<0.05）及细胞死亡率（p<0.05）3、细胞衰老-β-半乳糖苷酶染色检测转染后衰老细胞数变化取 6 孔板转染成功后的 LNCaP-AI 细胞及空白对照组、阴性对照组，行细胞衰老-β -半乳糖苷酶染色，观察下调 PTTG1 的表达对 LNCaP-AI 细胞衰老的影响，每组设 3 个副孔，重复 3 次实验。每孔随机选取 3 个视野，分别计算衰老细胞数及阳性率。实验结果显示：在转染 72h 后转染组染色阳性率及相对阳性细胞数较各对照组明显升高，，细胞染色阳性率高达 63.5±2.35%（p<0.05）。如图 3。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.25

【参考文献】