锑通过类雄激素效应促进前列腺癌进展机制研究

发布时间：2020-02-06 02:33

【摘要】：目的:初步探究低剂量锑暴露的类雄激素样作用,并探究其作用机制。方法:首先筛选出锑促进LNCaP细胞增殖的最适浓度,然后在去雄激素的条件下用锑、雄激素分别处理LNCaP细胞,再通过采用CCK-8和Transwell实验验证锑是否有类似于雄激素促进LNCaP细胞增殖、侵袭的效应;将锑和雄激素拮抗剂康士得同时处理LNCaP细胞,观察上述增殖和侵袭增加的效应是否降低或消失,由此明确锑有无类雄激素效应;用锑处理LNCaP细胞,采用RT-q PCR及Western Blot方法分别检测锑处理后LNCaP细胞的AR蛋白及AR m RNA的表达的影响;通过采用RT-q PCR方法检测锑处理后AR下游调控基因PSA及NKX3.1m RNA表达的影响,明确锑是否增加AR的转录活性水平;通过Western Blot方法检测不同浓度状态下低剂量锑暴露对AR磷酸化水平表达的影响,初步探究锑的类雄激素效应的机制。结果:在去雄激素的完全培养基条件下,LNCaP细胞几乎不增殖。低剂量的锑暴露可以促进LNCaP细胞增殖,并且以0.5u M浓度状态下的锑暴露促进增殖效应最为明显,与雄激素有类似促进细胞增殖的作用(P0.05),而其增殖效应均可被雄激素拮抗剂所拮抗,因此认为重金属锑具有类雄激素效应,且其作用的位点是AR;Transwell实验结果显示锑暴露和雄激素可以增强LNCaP细胞的侵袭能力(P0.05),且其均可被雄激素拮抗剂所拮抗,再次证实重金属锑具有类雄激素效应;Western Blot和RT-q PCR方法结果提示锑暴露对AR蛋白和m RNA水平的表达无明显影响。RT-q PCR结果显示低剂量锑暴露可以促进AR下游靶基因PSA、NKX3.1的m RNA水平的表达,且其效应均可被雄激素拮抗剂拮抗,说明锑暴露虽然对AR蛋白和m RNA水平表达无明显影响,却可以提高AR的转录活性水平。Western Blot结果表明在一定范围内,随着锑浓度的升高AR磷酸化水平也升高,由此说明锑可以通过磷酸化修饰来发挥类雄激素的效应。结论:低剂量锑暴露具有类雄激素效应,且这种效应可以被雄激素拮抗剂所阻断;锑的类雄激素效应是通过使AR发生磷酸化修饰作用来增加AR的转化活性,进而促进前列腺癌的发生和发展。
【图文】：

细胞的增殖效应几乎被完全抑制。因此低剂量的锑暴露可以促进 LNCaP 细胞增殖。并且当锑的浓度为 0.5uM 时促进细胞的增殖效应最大。图1 将LNCaP细胞接种在96孔板内，用完全培养基培养细胞的密度至70%左右，换无血清培养基对细胞处理24h,然后再将含有不同浓度的锑的去激素培养基培养24h、72h后用CCK-8法检测细胞的活性，绘制不同时间的细胞增殖曲线。结果表示三次实验的平均值±标准差。

实验结果显示在培养72h后，，DHT处理的LNCaP细胞数目增加了4倍(P<0.05)。Sb处理72h后LNCaP细胞数目增加了2.5倍(P<0.05)，且这种增殖效应能够被雄激素拮抗剂康士得所拮抗(P<0.05)，见图2；由于康士得特异性竞争性结合AR，因此说明重金属锑具有类雄激素的效应，且其作用位点为AR。图2 将LNCaP细胞接种在96孔板内，用完全培养基培养细胞的密度至70%左右，换无血清培养基对细胞处理24h，然后添加相应含有双氢睾酮、锑、康士得的去激素完全培养基，再继续培养72h后用CCK-8法检测细胞的活性。结果表示三次实验的平均值±标准差。＊P<0.05。Sb：锑；DHT：双氢睾酮；Cas：康士得。2.3 锑对LNCaP细胞侵袭作用具有类雄激素效应将LNCaP细胞分别在含有空白对照、0.5uMSb、1nMDHT、1uMCas及Sb+Cas的去激素培养基处理48h，然后将各组处理后添加到Transwel小室内
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.25

【参考文献】

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1 韩苏军;张思维;陈万青;李长岭;;中国前列腺癌发病现状和流行趋势分析[J];临床肿瘤学杂志;2013年04期

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1 周巧巧;重金属的雌激素样效应及其机制研究[D];华中师范大学;2010年

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本文编号：2576783