分泌卷曲蛋白5改善大鼠肾间质纤维化及机制探讨

发布时间：2020-03-18 11:29

【摘要】：目的观察SFRP5在大鼠肾间质纤维化中的作用,探讨其对Wnt信号通路的影响及肾间质纤维化的关系。方法选取雄性成年SD大鼠(36只),随机分为假手术组(12只)、UUO组(12只)、UUO+SFRP5组(12只)。通过行左侧输尿管结扎构建UUO模型。UUO+SFRP5组大鼠分别于左侧输尿管结扎第1天及第7天,予腹腔局部注射编码SFRP5基因的腺病毒。分别于术后第7天及第14天从各组中抽取6只大鼠,行腹主动脉取血并摘除左侧肾脏组织。检测各组大鼠血清肌酐、尿素氮、钙、磷水平,取左侧肾脏冠状位切分成两部分,一部分于10%福尔马林液固定后行病理切片及Masson染色,对比各组肾脏纤维化水平;另一部分肾组织保存于-80℃冰箱待行蛋白水平检测,通过Western blot检测各组大鼠肾脏中SFRP5、α-SMA、E-钙黏素、β-catenin、Snail蛋白水平。结果与假手术组大鼠相比,术后第7天及14天,UUO组、UUO+SFRP5组大鼠血清肌酐水平升高,差异具有统计学意义(P0.05),但UUO组及UUO+SFRP5组无明显差异;UUO组及UUO+SFRP5组大鼠行左侧输尿管结扎后,随着输尿管结扎时间延长,肾脏体积渐增大,肾实质逐渐变薄,Masson染色可见UUO组、UUO+SFRP5组大鼠肾脏第7天肾小管扩张,胶原纤维增加,染色加深,14天时病变明显加重,而在相同时间节点,UUO+SFRP5组大鼠肾小管扩张、间质增宽程度及胶原在间质沉积程度均显著低于UUO组,差异具有统计学意义(P0.05);行Western blot检测各组E-钙黏素、α-SMA、SFRP5、β-catenin、Snail蛋白表达水平,与假手术组相比,UUO组及UUO+SFRP5组大鼠肾脏组织中α-SMA、β-catenin、Snail蛋白表达增加,E-钙黏素表达减低;进一步比较发现UUO+SFRP5组大鼠肾组织α-SMA、β-catenin、Snail蛋白增加程度及E-钙黏素降低程度均低于UUO组,且具有统计学差异(P0.05)。结论予大鼠行单侧输尿管结扎后,结扎侧肾脏组织表现明显肾间质纤维化,伴有Wnt/β-catenin信号通路的异常激活。肾脏局部过表达SFRP5后,肾间质纤维化程度可有一定程度改善。其机制可能与SFRP5抑制经典Wnt/β-catenin信号通路有关。
【图文】：

15图 1：术后 7 天及 14 天假手术组、UUO 组及 UUO+SFRP5 组大鼠血清生化指标比较（组大鼠血清肌酐水平,与假手术组相比，术后 7 天及 14 天 UUO 组及 UUO+SFRP5 组均明

通过 Western blot 检测各组 SFRP5 表达水平，结果显示 7 天及 14 天时UUO+SFRP5 组 SFRP5 蛋白表达较同时间点假手术组、UUO 组显著增加，提示腺病毒转载成功，SFRP5 在肾脏组织实现过表达；与假手术组相比，术后 7 天及 14 天，UUO 组、UUO+SFRP5 组总 β-catenin表达水平增加，但 UUO+SFRP5 组较 UUO 组显著减少(P<0．05)，见图 3。
【学位授予单位】：首都医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R692

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本文编号：2588653