TRIM2下调β-catenin抑制肾透明细胞癌增殖和迁移的作用研究

发布时间：2020-03-22 14:00

【摘要】：目的:肾细胞癌约占成人恶性肿瘤的2%,其中肾透明细胞癌占所有肾细胞癌的80%-85%,且近几十年来其发病率不断上升。据统计,每年约有20.9万例新发病例和10.2万人死于肾细胞癌。在最初的诊断中,20-30%的患者有转移性肾细胞癌,转移仍是肾细胞癌相关死亡的主要原因。目前,手术是治疗肾细胞癌的首选方式,但术后复发率约为30%。此外,肾细胞癌对化疗/放疗和靶向治疗方案均不敏感。因此,迫切需要探索新的基因来揭示肾透明细胞癌的分子机制、诊断和治疗提供新的线索和策略。在本研究中,我们检测了TRIM2在肾透明细胞癌癌组织和正常肾组织中的表达,比较了不同分期和分级的TRIM2表达水平,并对肾透明细胞癌患者进行了Kaplan-Meier生存分析。此外,我们还评估了TRIM2对肾透明细胞癌中的增殖和迁移的影响。为了进一步研究其机制,我们检测了肾透明细胞癌细胞中重要迁移标志物的表达。本研究旨在为肾透明细胞癌的诊断和治疗提供新的分子靶点。方法:1.采用组织微阵列免疫组织化学染色法检测50例肾透明细胞癌患者肾肿瘤组织和正常组织中TRIM2的表达情况。2.从UALCAN(http://ualcan.path.uab.edu/index.html)数据库中,我们研究了TRIM2在肾透明细胞癌癌组织和相应正常肾组织中的mRNA表达情况,比较了不同分期和分级的TRIM2表达水平,并对肾透明细胞癌患者进行Kaplan-Meier生存分析。3.将携带TRIM2 cDNA的质粒转染到两株ccRCC细胞株(786-O和769-P)中,采用CCK8法和平板克隆形成实验检测肿瘤细胞增殖能力。4.在786-O和769-P细胞中转染TRIM2 cDNA和对照cDNA,采用划痕实验和Transwell实验观察TRIM2对肾透明细胞癌细胞迁移能力的影响。5.为了进一步研究TRIM2影响癌细胞的迁移及其机制,采用western blot和IP检测肾透明细胞癌癌细胞中重要迁移标志物的表达及其相互作用。结果:1.在50例肾透明细胞癌患者组织芯片中,78%患者TRIM2在肾肿瘤组织低表达。2.在UALCAN中,正常受试者的TRIM2 mRNA表达高于原发肿瘤(P0.001),正常受试者的TRIM2表达高于其他4个分期和分级的患者(P0.001),说明TRIM2可能是肾透明细胞癌的抑癌因子。Kaplan-Meier生存分析显示,TRIM2高表达的肾透明细胞癌患者组比低/中TRIM2水平的患者组预后好(P0.001)。3.转染过表达的TRIM2质粒后,q-PCR结果表明786-O和769-P细胞的TRIM2水平显著升高。Western blot结果表明,成功将带有HA-tag的TRIM2过表达质粒转染到两株肾透明细胞癌细胞株中。CCK8实验表明,过表达TRIM2可显著抑制肿瘤细胞增殖能力(P0.001),转染TRIM2的786-O(P0.01)和769-P(P0.001)细胞的克隆形成能力也显著下降。4.采用划痕实验和transwell实验检测过表达TRIM2的786-O和769-P细胞的迁移能力。划痕实验实验显示,过表达TRIM2显著抑制了肾透明细胞癌两个细胞的迁移能力(P0.001),transwell实验也表明,转染TRIM2后,两个细胞株的细胞数量均降低(P0.001)。5.我们发现TRIM2能下调β-catenin,且TRIM2质粒在786-O和769-P细胞转染量与β-catenin表达成负相关。在293-T细胞中,转染TRIM2质粒不仅可下调β-catenin,且IP结果显示TRIM2可与β-catenin相互作用。结论:1.TRIM2在肾肿瘤组织中的表达比正常肾组织低。2.正常受试者的TRIM2表达高于其他4个分期和分级的患者,且高表达TRIM2的肾透明细胞癌组患者较比TRIM2低/中水平组的预后好。3.TRIM2通过下调β-catenin抑制肾透明细胞癌细胞增殖和迁移。
【图文】：

陆军军医大学硕士学位论文(10)苏木素复染 2min，用自来水冲洗，然后苏木素分化液分化 3 秒，自来水冲in，用苏木素返蓝液返蓝，然后自来水冲洗。(11)脱水： 70%酒精 1min；80%酒精 1min；90%酒精 2mim；无水乙醇 5min；苯一号 3min；二甲苯二号 3min 中脱水透明，将切片晾干，滴加适量中性树胶封片(12)显微镜下拍照，采集图像并分析。2 实验结果2.2.1 组织芯片免疫组化检测 TRIM2 在肾透明细胞癌肿瘤和正常肾组织中的表达在 50 例肾透明细胞癌患者组织芯片中，78%患者中的 TRIM2 表达在肾透明细肿瘤组织中的比正常组低。

打开电脑登录 UALCAN 数据库（http://ualcan.path.uab.edu/index点击 Analysis 后，输入 TRIM2，选择 Kidney renal clear cell carcie。点击 Expression 后，即可显示 TRIM2 在肾透明细胞癌癌组织及癌达情况；选择 individual cancer stages 及 tumor grade 就可显示 TR级情况下的表达。点击Survival，即可显示 TRIM2 对肾透明细胞癌患者 Kaplan-Meie结果1 TRIM2 在肾透明细胞癌癌组织及正常肾组织的表达情况ALCAN 中，TRIM2 在肾透明细胞癌癌组织中的表达明显低于正）。
【学位授予单位】：中国人民解放军陆军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.11

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本文编号：2595140