GLP-1,7-36a及其代谢产物9-36a对肾脏足细胞自噬及凋亡的作用及机制

发布时间：2020-03-26 09:03

【摘要】：目的:胰高血糖素样肽(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是一种肠肽类激素,GLP-1类药物是近年研发的治疗糖尿病新药,7-36a是其天然存在形式,9-36a是其主要的代谢活性产物。GLP-1受体可在肾脏表达,GLP-1可通过激活受体发挥保护肾脏作用,而其代谢产物对肾脏是否有保护作用以及通过何种途径起作用,目前并不明确。本研究旨在通过观察分别给予足细胞高糖、炎症因子刺激后,其自噬活性和凋亡水平是否受影响,来探讨GLP-1,7-36a及其代谢产物9-36a对足细胞自噬及凋亡的作用及机制,为糖尿病肾病的防治提供新思路。方法:将体外培养的人肾脏足细胞分为NC组、HG组、HG+9-36a组、HG+7-36a组、TNF-α组、TNF-α+9-36a组、TNF-α+7-36a组。第一部分研究:将加入处理因素24小时后的各组细胞提取蛋白并测定浓度,用Western Blotting检测各组自噬相关蛋白mTOR、Phospho-mTOR、Beclin1、LC3、ATG5、ATG 16L1,比较各组蛋白表达差异,应用SPSS 23.0进行统计分析。第二部分研究:将加入处理因素48小时后的各组细胞用TUNEL法检测其凋亡情况,从每个样本取5个视野,统计红色荧光标记的细胞个数占该视野所有细胞个数的百分比作为凋亡细胞百分率,应用SPSS 23.0进行统计分析。结果:第一部分研究:1、GLP-1,7-36a及9-36a对高糖处理足细胞的影响(1)与NC组相比,HG组LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表达量增多(P0.05),而HG+9-36a组、HG+7-36a组LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表达量无明显变化(P0.05);与HG组相比,HG+9-36a组、HG+7-36a组LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表达量减少(P0.05);HG+9-36a组和HG+7-36a组相比较,LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表达量无明显变化(P0.05);(2)与NC组相比,HG组、HG+9-36a组、HG+7-36a组ATG 5的表达量均增多(P0.05);与HG组相比,HG+9-36a组、HG+7-36a组ATG 5的表达量均无明显变化(P0.05);(3)与NC组相比,HG组、HG+9-36a组、HG+7-36a组ATG 16L1的表达量均无明显变化(P0.05);2、GLP-1,7-36a及9-36a对TNFα处理足细胞的影响(1)与NC组相比,TNF-α组LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表达量增多(P0.05),而TNF-α+9-36a组、TNF-α+7-36a组LC3、Beclin1及Phospho-mTOR表达量无明显变化(P0.05);与TNF-α组相比,TNF-α+9-36a组、TNF-α+7-36a组LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表达量减少(P0.05);TNF-α+9-36a组和TNF-α+7-36a组相比较,LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表达量无明显变化(P0.05);(2)与NC组相比,TNF-α组、TNF-α+9-36a组、TNF-α+7-36a组ATG 5的表达量均增多(P0.05);与TNF-α组相比,TNF-α+9-36a组、TNF-α+7-36a组ATG 5的表达量均无明显变化(P0.05);(3)与NC组相比,TNF-α组、TNF-α+9-36a组、TNF-α+7-36a组ATG 16L1的表达量均无明显变化(P0.05);第二部分研究:(1)与NC组相比,NC(+)组、HG组凋亡细胞百分率均升高(P0.05),与NC(+)组相比,NC组、HG组、HG+9-36a组、HG+7-36a组凋亡细胞百分率降低(P0.05);与HG组相比,HG+9-36a组、HG+7-36a组凋亡细胞百分率降低(P0.05);(2)与NC组相比,NC(+)组、TNF-α组凋亡细胞百分率均升高(P0.05),与NC(+)组相比,NC组、TNF-α组、TNF-α+9-36a组、TNF-α+7-36a组凋亡细胞百分率降低(P0.05);与TNF-α组相比,TNF-α+9-36a组、TNF-α+7-36a组凋亡细胞百分率降低(P0.05)。结论:(1)高糖和TNF-α可以激活足细胞自噬,并诱导其发生凋亡。(2)GLP-1,7-36a及其代谢产物9-36a可以抑制高糖与炎症因子诱导的足细胞自噬,并减少足细胞凋亡。
【图文】：

图 1 高糖处理的足细胞 LC3 的表达情况注：* 与 NC 组比较 P＜0.0.5，## 与 HG 组比较 P＜0.05.2 Beclin1 的表达情况

图 2 高糖处理的足细胞 Beclin1 的表达情况注：* 与 NC 组比较 P＜0.0.5，，## 与 HG 组比较 P＜0.05 ATG 5 的表达情况
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.2;R692.9

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本文编号：2601236