依普利酮对高糖诱导的纤维化相关因子在肾小管上皮细胞表达的影响

发布时间：2020-04-04 22:11

【摘要】：目的:通过体外高糖诱导肾小管上皮细胞构建糖尿病肾病的模型,观察依普利酮(Eplerenone,EP)对糖尿病肾病肾纤维化的影响,并探讨其可能的作用机制,为临床用药提供相关的依据和参考。方法:1.细胞培养:细胞株为人近曲肾小管上皮细胞(human renal tubular epithelial cell,HK-2),实验使用第3~5代细胞。HK-2细胞生长于含10%的胎牛血清DMEM/F12培养基中,置于37℃、5%CO2培养箱中进行孵育,使用0.25%胰酶进行消化、传代;2.细胞分组:(1)低糖对照组:葡萄糖终浓度为5.5 mmol/L,并用DMEM/F12培养液培养细胞;(2)高糖组:高糖DMEM/F12培养基培养细胞,葡萄糖终浓度为30 mmol/L;(3)依普利酮+高糖组:在高糖组的基础上分别加入浓度为1×10-4 mol/L、1×10-5 mol/L、1×10-6mol/L的依普利酮;3.以上各组细胞作用72 h后,分别收集细胞,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-PCR)检测各组细胞TGF-β1 mRNA、FN mRNA的表达,并用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞TGF-β1、FN蛋白表达情况。结果:1.RT-PCR结果显示,在5.5 mmol/L低糖对照组中,TGF-β1 mRNA、FN mRNA水平呈低表达,与低糖对照组相比,30mmol/L高糖组TGF-β1 mRNA、FN mRNA的表达水平显著增加(P0.01),具有统计学差异;而依普利酮干预后TGF-β1 mRNA、FN mRNA的表达与高糖组相比明显下降(P0.05),且TGF-β1mRNA、FN mRNA的表达随着依普利酮的浓度的增高而逐渐降低,呈浓度依赖性;2.Western blot结果显示:与RT-PCR结果一样,低糖对照组TGF-β1、FN蛋白呈低表达,高糖组与低糖组相比,TGF-β1、FN蛋白表达明显增加(P0.05),依普利酮干预后TGF-β1、FN蛋白表达与高糖组相比明显下降(P0.05)。结论:1.高糖刺激可导致肾小管上皮细胞TGF-β1、FN纤维化因子表达增高,而通过依普利酮的干预后可降低体外高糖诱导的肾小管上皮细胞的TGF-β1、FN的表达水平;2.依普利酮对肾功能的保护作用可能与下调TGF-β1、FN的表达,从而减轻肾纤维化对肾脏的损害有关。
【图文】：

TGF-β1/GAPDH 0.17±0.12 1.67±0.17# 0.54±0.10* 0.65±0.08* 1.22±0.18*低糖对照组相比，P<0.05；*表示与高糖L H E1 E2 E3TG

各组TGF-β1蛋白表达量#：VSLgroup，，P<0.05；*：VSHgroup，P<0.05
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.2;R692.9

【参考文献】

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本文编号：2614133